大鼠肝组织免疫组化实验服务

一、样本处理与模型构建

1. ‌样本制备‌

• 肝组织需经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片（5μm）或冷冻切片（8-10μm），脱蜡后需抗原修复处理
  

• 肝硬化模型可通过CCl₄皮下注射或胆总管结扎（BDL）诱导，纤维化评估需结合Masson染色
  

• 卵圆细胞增殖模型采用2-乙酰氨基芴（2-AAF）灌胃联合肝部分切除术，可检测OV6、CK19等标志物
  

2. ‌病毒检测‌

• 乙型肝炎病毒（HBV）检测中，HBsAg阳性反应物分布于肝细胞胞核、胞浆及胞膜，HBcAg则主要位于胞核和胞浆
  

二、免疫组化操作流程

1. ‌染色方法‌

• 常用SABC法或荧光标记，一抗孵育条件多为4℃过夜（如检测α-SMA、Collagen I等纤维化标志物）

• 阻断内源性过氧化物酶需3% H₂O₂处理，血清封闭时间建议30分钟

2. ‌信号检测‌

• DAB显色后，阳性信号表现为棕黄色颗粒（如PCNA检测需观察细胞核着色）

• 荧光染色需避光操作，常用Cy3/FITC标记二抗

三、结果分析与应用

1. ‌病理评估‌

• 肝纤维化模型中，活化的肝星状细胞（HSCs）可通过α-SMA、GFAP抗体鉴别，门脉区成纤维细胞则显示Vinculin阳性

• 褪黑素干预后，PI3K/AKT通路蛋白（如P-AKT）表达降低提示抗纤维化效应

2. ‌定量方法‌

• 使用图像分析软件计算阳性区域面积比（如丹参酮ⅡA可抑制肝衰竭组织PCNA表达）

四、注意事项

• 病毒检测时需设阴性对照，HBV/HEV共感染样本可能出现100% HEV阳性率

• 冷冻切片应避免反复冻融，石蜡切片脱蜡低易导致非特异性染色

• 动物模型需规范分组（如褪黑素剂量需设2.5-10mg/kg梯度）

如需特定蛋白（如AFP、CD34）的检测方案，可结合双染技术或原位杂交进一步验证