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技术文章
三聚氰胺的快速检测
点击次数：1302 发布时间：2008-9-24
三聚氰胺的快速检测
三聚氰胺简称三胺、氰脲酰胺，是一种用途广泛的具有氮杂环结构的有机化工原料，因其结构中还有多个氨基氮，而目前对蛋白的定量主要依靠凯式定氮，因而三聚氰胺被一些不法商贩添加到蛋白中以提高蛋白检测中氮的含量。2007年3月美国发生的猫狗宠物非正常死亡事件以及zui近国内的奶粉事件都是由此造成的。目前，检测三聚氰胺的主要方法是HPLC、LC-MS、GC-MS，但对仪器及实验室要求较高，样品处理和操作也相对要求较高。相对而言，检测试剂盒操作方便，且不需要大笔的仪器投入，同时也具有很好的灵敏度。这类试剂盒多采用直接竞争性酶联免疫检测(ELISA)， 对UD和60%甲醇两种方法处理样品所获得的三聚氰胺萃取液进行免疫测定可以获得相同的结果，可用来定量检测被污染样品中的三聚氰胺。
检测原理：三聚氰胺检测试剂盒是竞争性酶联免疫反应。三聚氰胺从样品中萃取出来。三聚氰胺-HRP，样品萃取液和标准品一起加入包备有三聚氰胺抗体的微孔中发生反应，经过30分钟的培养，样品中的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP与三聚氰胺抗体竞争性结合，任何没有结合的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP将被冲洗掉，显色酶底物加入微孔中，任何结合的三聚氰胺-HRP都会使液体现蓝色。20分钟后终止反应，用酶标仪读数。将未知样品的读数和标准品的读数比较就能得出样品中的三聚氰胺浓度。
检测原理：三聚氰胺检测试剂盒是竞争性酶联免疫反应。三聚氰胺从样品中萃取出来。三聚氰胺-HRP，样品萃取液和标准品一起加入包备有三聚氰胺抗体的微孔中发生反应，经过30分钟的培养，样品中的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP与三聚氰胺抗体竞争性结合，任何没有结合的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP将被冲洗掉，显色酶底物加入微孔中，任何结合的三聚氰胺-HRP都会使液体现蓝色。20分钟后终止反应，用酶标仪读数。将未知样品的读数和标准品的读数比较就能得出样品中的三聚氰胺浓度。
实验所需仪器设备及材料：
1.去离子水或蒸馏水（ZealPure）
2.20-200ul的单道微量加样枪(NPX-200)
3.50-20000ul的8道微量加样枪(00-NP7-8L)
4.酶标仪(405nm)(BioTek ELx800)
5.计时器(Casio)
6.洗瓶(Nalgene)
1.去离子水或蒸馏水（ZealPure）
2.20-200ul的单道微量加样枪(NPX-200)
3.50-20000ul的8道微量加样枪(00-NP7-8L)
4.酶标仪(405nm)(BioTek ELx800)
5.计时器(Casio)
6.洗瓶(Nalgene)
检测程序：
1.所有试剂恢复到室温，洗瓶装好去离子水；
2.准备好所需要的微孔条；
3.加100µL各个浓度的标准品或稀释后样品提取物到小孔，加50µL三聚氰胺-HRP；
4.轻微震荡60秒，培养30分钟；
5.倒掉小孔中液体，用移液器加水至小孔，倒掉液体。再重复操作3遍；
6.每个小孔加100µL底物；
7.培养20分钟；
8.每个小孔加100µL终止液；
9.于酶标仪450nm读数。
结果解释：
1.半定量可以由样品的吸光度值和标准品的吸光度值的比较得出。样品颜色比标准品颜
2.准备好所需要的微孔条；
3.加100µL各个浓度的标准品或稀释后样品提取物到小孔，加50µL三聚氰胺-HRP；
4.轻微震荡60秒，培养30分钟；
5.倒掉小孔中液体，用移液器加水至小孔，倒掉液体。再重复操作3遍；
6.每个小孔加100µL底物；
7.培养20分钟；
8.每个小孔加100µL终止液；
9.于酶标仪450nm读数。
结果解释：
1.半定量可以由样品的吸光度值和标准品的吸光度值的比较得出。样品颜色比标准品颜
色浅的话，样品中三聚氰胺浓度比标准品浓度高，样品颜色比标准品颜色深的话，三聚氰胺浓度比标准品浓度低。
2.定量可由标准曲线图得出，用样品的吸光作X轴，标准品浓度的对数值作Y轴。Y
2.定量可由标准曲线图得出，用样品的吸光作X轴，标准品浓度的对数值作Y轴。Y
轴上的相应的点乘以相应的稀释度就是样品的浓度。