（一）载玻片
载玻片厚度应在0．8～L 2mm之间，太厚的玻片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚焦。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英载玻片。

（二）盖玻片
盖玻片厚度在o．17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光又可激发标本。

（三）标本
组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不能充分激发。另外，细胞重叠或杂质掩盖、背景非特异染色引起的荧光影响判断。

（四）镜油
一般暗视野荧光显微镜和油镜观察标本时，必须使用镜油，使用特制的无荧光镜油，也可用甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。

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