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检测炭疽免疫电化学与磁珠免疫荧光法
阅读:845 发布时间:2011-7-6ECLIA基于电极表面Ru(bpy)2+3标记抗体与过量TPA反应产生光子的氧化还原反应原理。整个反应发生于磁珠与正极附近区域内。炭疽芽孢杆菌检测范围为102一104CFU。捕获抗体通过生物素2链亲和素作用固定于磁珠表面。MPFIA应用抗体包被的磁珠作为固相基质,悬浮于溶液中,供菌体捕获,整个反应在微孔板中进行。这样捕获抗体一细菌一碱性磷酸酶标记抗体形成夹心,后者又作为报告者与碱性磷酸酶底物At-tophosTM发生反应,产生荧光,从而达到检测之目的。ECLIA较MP-FIA敏感性至少高10倍。二者与传统的ELISA相比优势在于:
①磁珠表面积大,抗体固定密度高;
②磁珠悬浮于溶液中,加快抗原-抗体反应速度;
③临床和生物样品中靶细菌可直接被捕获、分离,甚至在磁珠表面浓缩。
免疫检测方法为研制炭疽芽孢杆菌检测仪器提供了较大的空间,但还受到抗体数目、自然和基因工程变异的限制。大多数免疫学检测方法灵敏度尚不能满足军事上1~100个细菌的需要。Dang等研究了芽孢灭活方法对检测的影响。在直接ELISA中,无论是用多抗,还是用单抗,检测丁射线灭活芽孢的信号都降低了近50%,而对高压灭活的芽孢,用单抗检测信号降低了83%,用多抗检测信号增加了3倍,说明多抗以可溶性抗原-抗体为主,而单抗结合位点对高压和丁射线均敏感。由此可见,不同芽孢灭活方法影响着核酸与免疫学检测结果,在比较不同实验室结果时需加以考虑。在标本处理时,需考虑死芽孢与活芽孢的检测对比问题,尤其是在高度可疑而检测阴性时,一定要进行检测活芽孢试验的对比。这一试验还证明了灭活的芽孢检测不会导致假阳性。