化工仪器网
技术文章
转化生长因子α（TGF-α）的测定
阅读：1600 发布时间：2011-12-17转化生长因子α（transforming growth factor-α，TGF-α）的结构和功能与TGF相似，属EGF家族。检测EGF生物学活性的方法也可以检测TGF-α的活性。此外，EGF能诱导3T3小鼠的J2细胞合成DNA，TGF-α与EGF竞争受体，抑制EGF的作用，故可通过抑制EGF诱导的DNA合成试验检测TGF-α的活性。
1．将3T3J2细胞培养在含0．5％FCS的DMEM培养液中，用0．25％胰蛋白酶消化细胞，用细胞培养液洗涤细胞2次，并配成6×104／mL。
2．于24孔培养板每孔加入0．5mL细胞悬液，用细胞培养液作系列稀释的TGF-a待测样品或标准晶0．5mL、1nmol／LEGF和luCi（37kBp）3H-TdR，并设置单加EGF的阳性对照和高剂量TGF-a阴性对照，均设3复孔，总反应体积为lmL。
3．置37~C 5％C02温箱中培养72h。用PBS洗3次，每孔加入5％三氯醋酸lmL沉淀DNA，再用甲醇洗孔1次，离心去甲醇溶液。加入lmLlmol／LNaOH，溶解细胞。将各孔细胞吸人闪烁液瓶中，在p-计数仪上测定各孔的cpm。根据标准曲线计算待测样品中的TGF-a含量（活性）。