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上海源叶生物科技有限公司>技术文章>聚乙二醇(PEG)沉淀补体消耗试验

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聚乙二醇(PEG)沉淀补体消耗试验

阅读:823          发布时间:2012-2-8

用低浓度PEG将IC沉淀,沉淀物中加入补体,以溶血反应检测补体消耗率。
(一)试剂
1.热聚合人ISC:制备方法同PEG沉淀试验。
2.硼酸缓冲盐水(朋S) 含硼酸0.1mol/L,硼砂25mmol/L,NaCl 75mmol/L,调整为pH8.4
3.PEG 用BBS将PEG配成12.5%和2.5%。
4.0.2mol/L EDTA-Na2用1mol/L NaOH调整为pH7.2。
5.5XVB保存液 NaCl 85,0g,巴比妥5.75g,巴比妥钠3.75g,加蒸馏水约1 500ral,加热溶解后补加蒸馏水至2000mL。
6.GVB2+5×VB保存液400mL,0.03mol/LCaCl210mL,0.1mol/L MgCl2 10mL,2%明胶lOOmL,补加蒸馏水至2000mL,pH7.5。
7.致敏绵羊红细胞(SRBC) 2%SRBC悬液加等量1:1 000溶血素,37t水浴l0min,用GVB2+将致敏SRBC配成1.5×108/mL。
8.人补体与健康人对照血清 选用总补体溶血活性正常的健康人血清数份混合,作为补体来源。自3名健康人各取血清50mL,各按lmLl份分装,—70℃冻存,每次取3份血清作为对照。

(二)操作步骤
1.待测血清0.3mL,加0.2mol/L EDTA-Na2和BBS各50uL,充分混匀后加入12。5%PEG 0.1mL,混匀,置4℃ 90rain。
2.4℃ 1 700r/rain离心10min,弃上清,沉淀物用2.5%PEG洗1次,用玻璃棒搅拌,再于4℃ 1 700r/min离心15min,弃上清,管口余水用滤纸吸除。
3.加入37℃ 30min预温的GV铲’30uL,待沉淀溶解后,加入混合人补体10uL(用微量加样器准确加入)。混匀,置37℃,使补体与IC充分反应。
4.加入1.5X108/mL致敏SRBCl.0mL,37℃水浴振荡60rain。取出后立即加人4℃冷生理盐水6.5mL,离心,吸取上清液于414mn波长测吸光度。
5.每批试验以热聚合人IgG 5、10、25、50、lOOug/mL制备标准曲线。

根据标准曲线换算成相当于热聚合人IgG的ug/mL。

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