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技术文章

胶体金探针的质量鉴定

阅读:859          发布时间:2012-4-7

1。金颗粒的大小及均匀度
用有Formvar支持膜的镍网蘸取金标记试剂,空气干燥后,透射电镜下观察金颗粒的大小及均匀度,计算平均直径,如电镜放大倍数10万,照片放大为2.5倍,100000×2.5=250000=25nm。空气中干燥后乙酸铀负染,在透射电镜下观察,可见金颗粒周围有一明显的空晕,表示颗粒表面吸附着蛋白质分子。

支持膜(火棉胶膜)的制备;50mil5%的火棉胶+50mi乙酸戊酯,戊酯火棉胶。

2。用免疫细胞化学滤纸模型鉴定免疫金制剂的特异性和敏感性制得2.5%的乙酸
在WhatmamI号滤纸条上滴加2//l的抗原溶液(含抗原量分别为1ug、l00ng、10ng、3ng和lng),干燥后,纸条在甲醛蒸气中固定。加适当稀释的抗体作用1h,用TBS(0.05mol/LpH7.4Tris缓冲液,含.15mol/LNaCl),1%Triton X-l00洗3次,每次10rain。随后,纸条再用洗脱SephacrylS-400柱的相同洗脱缓冲液洗lOmin,再滴加不同稀释度的金标探针孵育1h。纸条再用TBS-Triton缓冲液洗3次,每次10rain。用TBS(不含TritonX—100)洗10min。再用双蒸水洗3次各5min。用银显影液显影30—40min。用双蒸水洗终止显影。

也可用下法试验金探针:将系列稀释的1:100、1;200、l;500、1:1000和l:10000的正常兔血清2/11分别滴加在滤纸条上,然后用甲醛蒸气固定,纸片再用适当稀释的羊抗兔IgG金探针在室温中孵育1h,洗涤,再按上述方法用银显影。这方法可以初步测定金探针的质量,也可用于一些抗原分析研究。

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