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B9-11细胞增殖法检测IL—11
阅读:1355 发布时间:2012-5-5通过对B9细胞的反复克隆,筛选出对IL-11高度敏感的B9-11细胞株,可用于IL11的检测。
1.B9-11细胞的克隆 ①向96孔培养板中每孔加入100uL含5%FCS和100ng/mL rIL-11的PMI-1640培养液;②加B9-11细胞于每孔l、3、9和27个细胞,每一细胞浓度做一板,培养2周,阳性生长孔定期更换培养液和补充rIL-1③取出生长较好孔内细胞,测其对IL-11的敏感度,所需IL-11浓度zui低的细胞克隆为B9-11克隆。
2.在96孔板中每孔加50rtl用含5%FCSRPMI-1640系列稀释的待测样品和5X103B9-11细胞,每孔终体积为150$tL。5%c02 37~C温箱中培养4d
3.加MTF温育4h,加酸化异丙醇溶解甲腊,测630nm—5701an的吸光度值。IL-11活性以UTll65表示,即B9-11细胞发生50%zui大增殖时稀释度的倒数除以30(因B9-11细胞对IL-11的敏感度为T1165细胞的30倍)。
4.注意事项 测定生物标本应加抗IL-6McAb以中和IL-6对结果的影响。