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技术文章

集落刺激因子(CSF)的测定

阅读:528          发布时间:2012-7-28

(一)生物活性检测法
1.骨髓细胞集落形成法
(1)用含有10%FCS的RPMI-1640培养液制备0.3%~0.4%的软琼脂。
(2)用淋巴细胞分层液分离得到骨髓单个核细胞,以3×104—5×104细胞/mL接种于软琼脂中,铺在无菌平皿内;37~C,5%C02温箱中培养14d。
(3)显微镜下计数大于或等于40个细胞的集落形成数,计算出集落刺激活力(colonystimulatingactivity,CSA),计算公式如下:
CSA=集落形成数/105骨髓单个核细胞

2.依赖株3H-TdR掺人法 GM-CSF的依赖细胞株是DA3.15和IF-1; M-CSF和G-CSF的依赖细胞株分别是M14和NES60.4。操作步骤同依赖株测IL-3。

(二)分子生物学方法
利用CSF特异性cDNA探针,检测细胞中特定的mRNA表达,可用CL.LYl+2—9细胞作对照。

(三)免疫学方法
同常规双抗体夹心ELISA法,该法能够检测到Pg/mL水平。国内已有试剂盒出售。

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