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小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACT)Elisa试剂盒说明书

阅读:813          发布时间:2011-1-18
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小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT )定量 检测试剂盒( ELISA

使用说明书

【小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT Elisa 试剂盒试剂盒名称】

小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT )定量 检测试剂盒( ELISA

【小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT Elisa 试剂盒试剂盒用途

定量检测小鼠血清、血浆及相关液体样本中 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT )的含量。

【小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT Elisa 试剂盒检测原理

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法( ELISA )。将标准品、待测样本加入到预先包被小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT )单克隆抗体透明酶标包被板中, 温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物 A B ,底物( TMB )在辣根过氧化物酶( HRP )催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT 浓度呈正相关, 450nm 波长下测定 OD 值,根据标准品和样品的 OD 值,计算样本中小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT )含量。

【小鼠 α1 抗胰糜蛋白酶( AACT Elisa 试剂盒试剂盒组成

1

酶标包被板

12 ×8

7

显色剂 A

6mL

2

标准品

0.3mL×6

8

显色剂 B

6mL

3

20 倍浓缩洗涤液

25mL

9

终止液

6mL

4

样本稀释液

6mL

10

说明书

1

5

特殊稀释液

6mL

11

封板膜

2

6

酶标试剂

6mL

12

密封袋

1

备注: 标准品( 1 6 号)浓度依次为: 4000 2000 1000 500 250 125 ng/ L .

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材

1 37 恒温箱

2、 标准规格酶标仪

3、 精密移液器及一次性吸头

4、 蒸馏水

5、 一次性试管

6、 吸水纸

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒操作步骤】

1 、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡 30 分钟。

2 、配液:用蒸馏水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3 、加标准品和待测样本:取足够数量的 酶标包被板,固定于框架上, 分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品 50μL ;待测样本孔中先加入待测样本 10μL ,再加样本稀释液 40μL (即样本稀释 5 倍);空白对照孔不加。

4 、温育: 37 水浴锅或恒温箱温育3 0min

5 、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min ,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 4 次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

6 、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液 50μL ,空白对照孔不加。

7 、温育: 37 水浴锅或恒温箱温育3 0min

8 、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min ,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 4 次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

9 、显色:每孔先加入显色剂 A 50μL ,再加入显色剂 B 50μL ,平板混匀器混匀 30s (或用手轻轻震荡混匀 30s ), 37 避光显色15min

10 、终止: 取出酶标板,每孔加终止液 50μL ,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

11 、测定: 以空白孔调零,在终止后 15 分钟内,用 450nm 波长测量各孔的吸光值( OD 值)。

12 、计算: 根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒样本要求】

1 、样本 不能含叠氮钠(NaN 3 ,因为 叠氮钠(NaN 3 )是 辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2、 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可 将标本放于 -20 ℃保存,但应避免反复冻融。

3 、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒注意事项】

1 、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3 、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

4 、牢记样本已经稀释 5 倍,计算结果乘以 5 才是样本实际浓度。

5 、本试剂盒定量范围为 125-4000ng/L ,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果( 125-4000ng/L 范围内),乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。

6 、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

7 、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头; 酶标 工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔 ;不得重复使用 封板膜

8 、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

9 、底物 B 对光敏感,避免长时间暴露于光下。

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒操作程序总结】

准备试剂,样品和标准品


加入准备好的样品和标准品, 37反应30分钟

洗板4次,加入酶标试剂, 37反应30分钟

洗板4次,加入显色液AB 37显色15分钟

加入终止液

15 分钟之内读OD

计算

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒检测范围

125ng/L - 4000ng/L

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒规格】

96T/

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒贮藏】

2-8 ,避光防潮保存。

【小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACTElisa试剂盒有效期】

6 个月

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