水样中5天前的溶解氧浓度减去5天后的溶解盐浓度。才会水样后，先测定水中的溶解氧，再把水样置于碘量瓶中20度密封培养5天，5天后再取出在测定水中的溶解氧。
   理论上BOD5是不会为负数的，因为水样中的有机物被消耗需要消耗氧气。但是如果培养时密封工作没有做好就有可能使得五天后的溶解氧含量大于五天前的，特别是五天后的温度明显低于五天前的时候。