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精品视频一区二区三区 传代培养的方法及其注意事项

时间:2025/5/9阅读:238
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精品视频一区二区三区 传代培养的方法及其注意事项

原理
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
材料和试剂
1. 细胞:贴壁细胞株
2. 试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)
3. 仪器和器材:倒置显微镜、培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
操作步骤
1. 吸除培养瓶内旧培养液。
2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。
3. 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。
4. 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。
5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6. 计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。
无菌操作注意事项 
1. 操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2. 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。
3. 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。
4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。
5. 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。                                

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