冰王烧烫膏对大鼠深Ⅱ度烧伤的修复及机制研究
冯启凯1，曲梅花1，季万胜2，李 艳1，辛 亭1，黎瀚文1，刘凤娇1
( 1． 潍坊医学院，山东省高校应用药理学重点强化建设实验室，山东 潍坊 261053;2． 潍坊医学院附属医院，山东 潍坊 261031)基金项目: 国家教育部留学回国人员科研启动基金( 2011 年第 43批)
作者简介: 冯启凯，男，硕士研究生
通信作者: 曲梅花，女，副教授，硕士生导师，研究方向: 神经内分泌
药理学，E-mail: qumeihua@ hotmail． com

摘要: 目的 研究探讨冰王烧烫膏对大鼠深Ⅱ度烧伤创面的修复及机制。方法 雄性 Wistar 大鼠 60 只，制备深Ⅱ度烧伤创面的大鼠模型后，随机分为烧烫膏组、京万红组、烧伤模型组，每组 20 只。测量大鼠烧伤后 1、3、7、13、21 d 皮肤创面的愈合率和血清 TNF-α 含量; 烧伤后 4d 免疫荧光法测 glut-2 受体的表达变化。结果 烧伤后 1 d 各组创面愈合率比较，差异无统计学意义( P ＞ 0． 05) ，7、13、21 d 烧烫膏能明显缩短烧伤大鼠皮肤创面愈合的时间，提高愈合率( P ＜ 0． 01) 。烧伤后 1、3、7、13、21 烧烫膏组大鼠血清 TNF-α 水平呈明显下降，与模型组比较差异有显著性( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。和模型组比较，烧烫膏组 glut-2 受体表达数目增加，差异有统计学意义( P ＜ 0． 01) 。结论 冰王烧烫膏对烧伤皮肤创面具有良好的修复作用并可能与降低血清 TNF-α 水平和增加 glut-2 受体表达有关。
关键词: 烧烫膏; 烧伤; 创面愈合; TNF-α; glut-2 受体; 荧光抗体反应

冰王烧烫膏系运用白矿油、白芝麻油、冰片等为主药制备而成的一种外用中药复合乳剂，在烧伤临床沿用多年，具有促进表皮细胞、组织细胞再生，有效避免瘢痕形成，减轻烧烫伤对皮肤的损伤度的功效，然而其作用机制一直未明。本实验通过观察冰王烧烫膏对大鼠深Ⅱ度烧伤创的治疗作用，探讨其可能的作用机制，为进一步促进其在临床广泛推广应用提供实验依据和理论基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试验动物 雄性 Wistar 大鼠 60 只，SPF 级，重量 200 ～ 220 g，由山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室提供，许可证号: SCXK 鲁 20130001。
1． 1． 2 主要试剂和试验仪器 冰王烧烫膏( 平舆冰王生物工程有限公司，批号 20140105) ; 京万红
( 天津 达 仁 堂 京 万 红 药 业 有 限 公 司，国 药 准 字Z12020440，批号 211897) ; 硫化钠( 天津博迪化工股份有限公司) ; 肿瘤坏死因子-α 酶联免疫检测试剂盒( 上海恒远生化试剂有限公司) ; Anti-Glut-2R ( 北京博奥森生物技术有限公司) ; 高速冷冻离心机( 德国 SIGMA 公司) ; 奥林巴斯 IX71 显微镜( 日本奥林巴斯公司) 。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 大鼠分组及背部烧伤模型的制备 wistar雄性大鼠 60 只，随机分为三组即烧烫膏组，京万红
组，烧伤模型组，每组 20 只。用 8% 硫化钠溶液在实验前 24 h 对大鼠背部两侧皮肤进行脱毛，脱毛面积 5 cm × 6 cm 左右，约 1 min 后用水充分清洗脱毛区，以防过度刺激皮肤。用 3% 戊ba比妥钠( 40 mgkg － 1) 腹腔麻醉后将大鼠四肢尽量伸展，于俯卧位固定在木质操作板上。室温下，将注满沸水直径4 cm 一端无堵头的中空大离心管直立于大鼠脱毛部，与皮肤紧密接触且保证水不流出。沸水与皮肤持续接触 15 s，将操作板及大鼠连同塑料管迅速翻转，造成深Ⅱ度烧伤模型( 经病理组织学检查) ，立即腹腔内注射乳酸钠林格氏液 5 mL 抗休克［1］。
1． 2． 2 创面处理及给药 烧烫膏组、京万红组每天早中晚 3 次分别涂以烧烫膏和京万红; 模型组在
相同时段涂无菌生理盐水。总给药时间持续 4 周。为防其舔舐伤口，所有大鼠造模后均在其头颈部套
自制纸硬壳项圈。在给药期间，所有大鼠单独分笼饲养，自由饮水并给予普通饲料喂养。
1． 2． 3 观察指标 ( 1) 大体观察每次换药时肉眼对比观察各组烧伤创面水肿渗出程度，是否有分泌
物及创周红肿等。( 2) 观察创面愈合率按照 Nagelschmidt 法，于烧伤后不同时间用透明塑料薄膜覆
盖于大鼠创面描记创面边缘，用规格相同纸壳按照描记的边缘剪下同样大小的面积进行称重。创面
愈合判断标准是痂皮自行脱落且有新生上皮形成。以烧伤第 1 天的面积作为原始面积，以后各时间点
测量的面积均和原始面积比。创面的面积转换为纸壳的重量，计算公式如下:创面愈合面积百分比 = ( 原始烧伤面积 － 各时间点创面面积) /原始烧伤面积 × 100% 。记录实验后 1、3、7、13、21 d 各组大鼠创面愈合情况并对各组大鼠创面的平均愈合天数进行统计和计算。
1． 2． 4 TNF-α 的检测 各组随机选取大鼠 10 只于烧伤后 1、3、7、13、21 d 经眼内眦采集静脉血 1 mL，室温静置于离心管 15 min 自凝，3 000 r·min － 1( r= 16 cm) ，离心 10 min 后取上层血清，于 － 80℃ 保存备用。血清中的 TNF-α 表达水平用 ELISA 法检测，具体按说明书所述方法操作。
1． 2． 5 Glut-2 受体的表达 烧伤后 4 d 各组随机选取大鼠 10 只颈椎脱臼处死，取末端回肠 2 ～ 3
cm，于 4% 多聚甲醛固定 24 h，石蜡切片，抗原修复，封闭，37℃ 孵 育 1 h，Glut-2R ( 兔 抗 鼠，1 ∶ 200 ) +0． 03% TritonX-100 室温过夜，PBS 漂洗，荧光二抗FITC( 山羊抗兔，1∶ 200) ，37℃ 避光孵育 1． 5 h，PBS漂洗，甘油封片，荧光显微镜下观察，随机选取 10个高倍视野( 200 × ) ，记录每个视野阳性细胞数目，取其平均值。
1． 2． 6 统计学处理 实验资料以均数 ± 标准差( x± s) 表示，用 SPSS13． 0 进行重复测量数据的方差分析，两两比较采用 LSD-t 检验的方法，P ＜ 0． 05 表示差异有统计学意义。

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