ELISA试剂盒试验标准曲线 做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败。下面将影响ELISA试剂盒曲线问题的原因做了总结：

一 OD 值不正常的可能原因是：

1 、试剂盒未回温，试剂盒回温到 25 ℃；

2 、温度控制不好，控制正确温度；

3 、孵育时间不准确，控制孵育时间；

4 、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤 4-5 次，每孔 250ul ，然后拍干；

5 、阳光直射，对着风直接吹，避风避光；

6 、酶标仪的波长错误，酶标仪的波长 450nm ；

7 、抗体的稀释错误，正确的稀释抗体；

8 、水质问题，用娃哈哈矿泉水代替。

二 白板的可能原因是：

1 、洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液；

2 、少加液体（错加液体），正确的步骤加液体。

三 无梯度可能原因是：

1 、标准品也污染，换标准品点板；

2 、 OD 值不正常，控制温度时间在做一次；

3 、人为点板，不要点板。

四 线性不好可能原因是：

OD 值不正常，控制温度时间在做一次。

做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意 ：

1 、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

2 、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈 S 型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

3 、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

4 、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

5 、标准曲线的样品数一般为 7 个点，但至少要保证有 5 个点。

6 、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数 R 至少要大于 0.98 ，对于有些实验，至少要 0.99 甚至是 0.999 。