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查找:兔血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒说明书

阅读:790          发布时间:2022-11-16

使用目的:

本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中血小板衍生生长因子 (PDGF) 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 兔血小板衍生生长因子 (PDGF) 水平。用纯化的 兔血小板衍生生长因子 (PDGF) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 血小板衍生生长因子 (PDGF) ,再与 HRP 标记的血小板衍生生长因子 (PDGF) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ,经过che底洗涤后 底物TMB显色。 TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 血小板衍生生长因子 (PDGF) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线 计算样品 中兔血小板衍生生长因子 (PDGF) 浓度。

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样 50 μ l ,待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ,然后再加待测样品 10 μ l (样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀

3.温育:用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟

4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50 μ l ,空白孔除外

7.温育:操作同 3

8.洗涤:操作同 5

9.显色:每孔先加入显色剂 A50 μ l ,再加入显色剂 B50 μ l ,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止 50μl,终止反应 (此时蓝色立转黄色)

11.测定:以空白孔调零, 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度(OD值) 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

保存条件及有效期

1 试剂盒保存: 2-8

2.有效期:6个月


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