本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定样本中环二腺苷酸（ C-di-AMP ）的含量。

实验原理

本试剂盒应用 酶联免疫竞争 法测定 标本 中 环二腺苷酸（ C-di-AMP ） 水平。用纯化的 环二腺苷酸（ C-di-AMP ）抗体 包被微孔板，制成固相 抗 体，往包被 单抗 的微孔中加入 环二腺苷酸（C-di-AMP），和 HRP 标记的环二腺苷酸（ C-di-AMP ）抗原，使它们竞争结合， ，经过che 底洗涤后 加 底物TMB显色。 样本 颜色的深浅和样品中的 环二腺苷酸（C-di-AMP）的含量 呈 负 相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中环二腺苷酸（ C-di-AMP ）的含量。

标本要求

1．标本处理：（1）水样   采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

（ 2 ）组织   样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70V：V：V)抽提，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，备查

2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1.加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

2.加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。

3.温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育6 0 分钟 。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

7.终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

8.测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后 乘以 总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围：

5pg/ml-400pg/ml

规格：

96份/盒

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期：6个月