一、实验概述 ‌

肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA实验是一种常用的免疫学实验方法，用于检测生物样本（如血清、血浆等）中TNF-α的浓度。该实验基于酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，通过双抗体夹心法实现TNF-α的特异性检测。

二、实验步骤‌

准备工作‌

获取TNF-α ELISA试剂盒，确保试剂盒在保质期内且保存条件符合要求。

准备实验所需器材，包括酶标仪（450nm波长）、高精度加样器及枪头、37℃恒温箱、蒸馏水或去离子水等。

‌包被孔板 ‌

如使用未包被好的孔板，需自行用TNF-α抗体进行包被。

将包被好的孔板置于4℃冰箱中孵育过夜（16-18小时），以确保抗体充分结合。

‌洗板 ‌

包被完成后，使用洗板机洗板4次，以去除未结合的抗体。

‌加入封闭液 ‌

向孔板中加入封闭液，封闭非特异性结合位点。

‌加样与孵育 ‌

向孔板中加入待测样本或标准品，然后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。

将孔板置于37℃恒温箱中孵育一定时间，使抗原与抗体充分结合。

‌再次洗板 ‌

孵育完成后，再次使用洗板机洗板，以去除未结合的检测抗体。

‌显色与测定 ‌

向孔板中加入显色底物（如TMB），在HRP的催化下显色。

显色完成后，加入终止液终止反应。

使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值）。

‌结果计算 ‌

根据标准品的OD值和浓度绘制标准曲线。

根据待测样本的OD值，在标准曲线上查找对应的TNF-α浓度。

三、实验注意事项 ‌

实验过程中需严格控制操作时间和温度，以确保实验结果的准确性。

使用高质量的试剂和器材，避免非特异性结合和污染。

实验结果需进行质量控制，如设置阴性对照和阳性对照，以确保实验的有效性。

四、实验应用 ‌

TNF-α ELISA实验在生物学和医学研究中具有广泛应用，可用于评估TNF-α在疾病发生和发展中的作用，以及评估药物治疗效果等。但需注意，该实验仅供科研使用，严禁用于临床诊断‌

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