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血细胞计数板的实验原理及注意事项
阅读：7642发布时间：2022-2-15
实验原理
在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞是否存活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞活力和增殖状况，如胰酶消化制备的细胞悬液中细胞存活率确定，冻存细胞复苏后的活力检测等。
存活测试的原理为染料排除实验，利用染料会渗入死细胞中而呈色，因活细胞细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用台盼蓝染料，如果细胞不易吸收台盼蓝，则用赤藓红B。计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼蓝染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼蓝与蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。
注意事项
滴细胞悬液时要干净利落，加量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片也会失败，应重做；过少易出现气泡；不理想时，应重做。
镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均匀，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。
计数时，对于位于边线或交界处的细胞/细胞团，遵循“计上不计下，计左不计右”的规则。
一个细胞团计做一个细胞。
计数板计数时，最适浓度为5～10×105细胞/ml，此范围外计数误差偏大。高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。如果细胞数目很少则要进行离心再悬浮于少量培养液中。
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