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【买试剂，找华雅】mRNA转染IVT攻略：流程及试剂推荐
阅读：516发布时间：2025-1-15
mRNA转染的优势
与DNA相比，mRNA转染具有以下优势：
- 高效且可控的表达：mRNA能迅速翻译为蛋白质，表达短暂且可控，降低过度表达风险。
- 细胞友好：mRNA引入细胞内不易造成损伤。
- 安全性与低免疫原性：mRNA不整合入宿主基因组，降低基因突变风险，降解产物为细胞自然成分。
- 快速响应与灵活性：mRNA快速合成能力使科学家能迅速调整实验方案。
IVT的主要步骤
模板制备
- 以质粒DNA为起点，通过琼脂糖电泳鉴定质粒。
- 选择超螺旋状态最佳的菌株，进行线性化质粒，选择合适的限制性内切酶（如BsaI）进行切割。
酶法加帽
- IVT后，使用牛痘病毒加帽酶和mRNA 2'-O-甲基转移酶为mRNA加帽，增强稳定性。
转录反应
- 准备线性化质粒模板，加入转录缓冲液、NTPs和RNA聚合酶，在37°C孵育合成大量mRNA。
纯化
- 采用柱纯化、磁珠纯化或酚/氯仿纯化等方法，去除杂质，提取纯净的mRNA。
定量与检测
- 使用紫外吸收法、染料法或毛细管电泳法对mRNA进行定量和纯度检测。
共转录法加帽
- 为提高效率，可在IVT过程中直接加入帽子类似物，实现转录与加帽同步进行。
IVT的主要试剂
目前市场上有多种成熟的商品化IVT试剂盒，如Thermo Fisher、NEB、诺唯赞、江苏申基等，均提供完善的解决方案。
转染试剂选择
ProteanFect
- 首·款基于蛋白递送的转染试剂，非常适合mRNA转染。
- 在多种难转染细胞系中效率显著优于lipofectamine。
ProteanFect在难转细胞中的应用
- 在Jurkat T细胞中，ProteanFect展现出对多种类型核酸的高效递送能力。
重庆市华雅干细胞技术有限公司主营产品：Lonza支原体检测试剂盒,Stemcell胚胎干细胞培养基,StemRD生长分化因子
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