离子交换液相色谱法中缓冲盐的使用

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 离子交换色谱法的基本原理

离子交换法是针对离子型样品，根据样品离子与固定相表面离子交换基团的交换能力差异进行分离。

相较于经典的离子交换树脂，硅胶基质离子交换固定相，机械强度高，耐高压，不溶胀，传质快，柱效高。

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离子交换法中色谱柱的选择

离子交换色谱法中，色谱柱的选择需要与待测组分相匹配，通常不用离子交换柱同时分析阴离子和阳离子。

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 离子交换的影响因素

样品在离子交换柱中的保留分离，除与样品离子与固定相的作用强弱有关，还受到流动相的pH、离子强度、有机溶剂种类等因素的影响。

pH的影响

pH的变化会 改变离子交换基团上可解离的 H+ 或者OH- 的数量，因此直接影响固定相的离子交换容量。pH对离子交换能力的影响如下图所示。

在反相色谱与离子交换中，有一个容易混淆的地方——pH值与pKa的关系。

反相色谱中，缓冲盐主要是抑制样品中的离子解离，保持分子状态，来增强待测物的保留；离子交换中，缓冲盐主要是促进样品中的离子解离，保持离子状态，以提高待测物与固定相的离子交换作用。

因此，阴离子交换（酸性化合物）通常选择pH>pKa+2.0；阳离子交换（碱性化合物）通常选择pH<pKa-2.0.

离子强度的影响

1. 由于含有不同离子的缓冲盐交换作用不同，因此相对洗脱强度顺序也存在差异。

含有阴离子的盐：（强）柠檬酸根>PO43->HCOO->CH3COO->OH-（弱）

含有阳离子的盐：（强）K+>NH4+>Na+>H+>（弱）

2. 流动相中盐的浓度越高，其与样品离子争夺固定相上反电荷位置的能力就越强，从而样品的保留效果变差，可通过调节流动相中的缓冲盐浓度改变保留时间。

有机溶剂的影响

在离子交换中，加入少量的甲醇、乙腈等有机溶剂，可以增加样品的溶解度，减少峰拖尾，但是也可能会降低样品的保留。

因此，在离子交换方法优化时，可以根据待测物的性质，从梯度洗脱程序，缓冲盐的种类、浓度、pH，以及有机相的种类和比例，这几个方面来进行调整。

离子交换色谱柱推荐

（一）强阳离子交换柱

CAPCELL PAK SCX UG80

产品优势：

1. 氢型强阳离子交换柱

2. 兼具包膜技术和高纯硅胶的优点

3. 良好的稳定性、寿命和性价比

检测项目：

二甲双胍、利巴韦林、葡jia胺、三聚氰胺、更昔洛韦、水苏碱、羧甲司坦、普鲁卡因按、苯扎氯铵、氨甲环酸、水溶性维生素、核苷酸、生物胺等。

（二） 弱阴离子交换柱

CAPCELL PAK NH2 UG80

产品优势：

1. 采用包膜技术和“桥式”键合方式

2. 可在LC-MS中使用

3. 正相、弱阴离子交换两种分配模式

检测项目：

糖类、尿囊素、奈达铂、糖精、奎尼酸、双氰胺/三聚氰胺、有机酸、维生素、VE、泛醇、核苷类、百草枯等。