1） 取准备好的蛋白裂解液，和2*上样缓冲液等体积混合，混匀后于100度煮10min，12000rpm离心5min，取适量体积上样。
2） 电泳：使用配制好的电泳液，90V电泳20min，120V电泳至结束。
3） 转膜：使用配制好的电转液，100V恒压电转90min。
4） 封闭：用1*TBST配制5%的脱脂奶粉/BSA溶液，将膜置于5%的脱脂奶粉/BSA溶液中，室温摇床上孵育60min。
5） 孵育一抗，孵育条件为2-8度摇床上孵育过夜。
6） 洗涤，用1*TBST洗3次，每次10min。
7） 孵育二抗，孵育条件为室温摇床上孵育60min。
8） 洗涤，用1*TBST洗3次，每次10min。
9） 显色和曝光，取显色A液和B液等体积混合，将混合后的液体铺满整张膜，反应2min，之后即可进行曝光操作。

溶液配制
电泳液：取10*电泳液100ml，加入纯化水，定容至1000ml。
电转液：取10*电转液100ml，加入800ml纯化水和100ml无水甲醇。
1*TBST：取10*TBST溶液100ml，加入纯化水，定容至1000ml。

2-8度保存,有效期6个月。