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一、产品简介
英诺思(immuno-X)人CD3/CD28激活磁珠用于激活人T细胞，促进T细胞增值和T细胞分化。该产品利用三维立体磁珠模拟抗原呈递细胞对T细胞的激活，ActBeads™ 提供的第一信号（CD3）和第二信号（CD28）使得T细胞高效扩增，避免T耗竭。
• ActBeads™ 激活磁珠浓度为4x107个/mL
• 磁珠粒径均yi，流式细胞仪分析时可与T细胞明显区分
二、试剂盒组分
产品名称 | 存储条件 | 缓冲液成分 | 功能 |
ActBeads™ Human CD3/CD28 Activator | 4°C保存，避免冷冻 | PBS, 0.1% BSA | 通过磁珠偶联的CD3/CD28抗体激活T细胞，促进T细胞增值和分化 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline
运输条件： 4°C运输
三、培养条件
·缓冲液：RPMI1640 培养基+10% FBS + 2 mM L-Glutamine+100 U/mL penicillin/streptomycin
·细胞因子：人IL2细胞因子
四、温馨提示
·T细胞分离时，确保FACS Buffer渗透压稳定，免疫细胞对渗透压非常敏感
·IL7、IL15可与IL2联合使用，促进T细胞增值
五、实验步骤
1. 激活或者扩增T细胞
步骤 | 说明 |
1 | 分离人T细胞，将其铺到96孔平底培养板中，细胞密度为8 x 104/孔，培养基200 μL |
2 | ActBeads™ 人CD3/CD28激活磁珠震荡混匀后，加入到细胞中，2 μL/孔 Note: 激活或扩增T细胞时，ActBeads TM和细胞比例为1:1；诱导Treg细胞分化时，磁珠和细胞的比例应增加到2:1 |
3 | 加入IL2细胞因子，终浓度为100 U/mL |
4 | 进行T细胞培养，5% 二氧化碳，37℃ |
5 | 培养48小时后，T细胞体积变大，形态多样 |
6 | 当细胞密度较大时，更换新鲜培养基或者将细胞转移至新的培养板 |
2. T细胞重新刺激
通常T细胞在扩增到第7-10天时，需要通过添加新鲜的ActBeads™ 和IL-2进行多次重新刺激。经过反复重新刺激后，CD8+ T细胞仍保持细胞毒性。
步骤 | 说明 |
1 | 将T细胞重悬后置于无菌离心管中，在磁力架上吸附2分钟 |
2 | 倒出/吸出T细胞，进行细胞计数 |
3 | 将T细胞重新铺到培养板中，密度0.5–1 × 106 cells/mL |
4 | 培养，5% 二氧化碳，37℃ |
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