精品网站在线免费观看 教您如何保养液相色谱仪

一、流动相管理：避免污染与沉淀

1.流动相配制要求

• 溶剂纯度：使用 HPLC 级试剂（如甲醇、乙腈、水相缓冲液），避免杂质堵塞管路或污染色谱柱。

• 水相处理：缓冲盐溶液（如磷酸盐、醋酸盐）需用超纯水配制，过滤（0.45 μm 滤膜）并超声脱气 10–20 分钟，防止气泡进入泵体或盐结晶析出。

• 混合流动相注意事项：

• 含缓冲盐的流动相避免与纯有机溶剂（如乙腈）直接混合，易产生盐沉淀（可先用低比例有机相过渡，如 10% 乙腈水相）。

• 长期存放的流动相应现配现用，酸性 / 碱性溶液（pH<2 或> 8）不宜超过 24 小时，防止微生物滋生或色谱柱损伤。

2.流动相过滤与脱气

• 溶剂瓶过滤头：定期检查溶剂瓶底部的不锈钢 / 钛合金过滤头，若吸附杂质或长菌，需用稀硝酸浸泡后超声清洗（每周至少 1 次）。

• 在线脱气机维护：脱气机膜长期使用后可能吸附气泡，可定期执行 “反吹" 操作（按仪器说明书），或用异丙醇冲洗脱气机管路（每月 1 次）。

二、关键部件保养：泵、进样器、色谱柱、检测器

1. 输液泵系统

• 泵头与密封圈维护：

• 避免空泵运行（易磨损密封圈），更换流动相时先排空管路气泡。

• 每天实验结束后，用 10% 甲醇水冲洗泵头及管路 30 分钟（若使用缓冲盐，需先用纯水冲洗 30 分钟去除残留盐），防止盐结晶磨损柱塞杆。

• 密封圈寿命约 3–6 个月（视使用频率），若出现压力波动或漏液，需及时更换（更换后用异丙醇低速冲洗泵头 2 小时）。

• 压力异常处理：

• 压力突然升高：可能是管路堵塞（如保护柱、色谱柱入口筛板），逐段排查并冲洗（用 50% 甲醇水低流速反冲，避免反冲色谱柱）。

2. 自动进样器

• 进样针与定量环维护：

• 避免进样针碰撞样品瓶或进样口，定期检查针尖是否弯曲或堵塞（可用放大镜观察）。

• 每天实验后用纯甲醇清洗进样针内外壁（自动进样器可设置洗针程序，如进样前后用甲醇洗针 3 次）。

• 定量环（如 10 μL、20 μL）若污染，可注入 10% 稀硝酸浸泡 30 分钟，再用超纯水冲洗至中性，最后用甲醇冲洗保存。

• 样品盘与管路清洗：

• 每周用 75% 乙醇擦拭样品盘，防止残留样品腐蚀金属部件。

• 长期不用时，将进样阀切换至 “load" 位，防止密封圈长时间受压变形。

3. 色谱柱

• 使用前预处理：

• 新柱拆封后，先确认柱效（按说明书测试标准品，如甲苯、萘的理论塔板数），再用初始流动相低流速（0.2–0.5 mL/min）平衡 30 分钟，逐步升至正常流速。

• 避免色谱柱反冲（除非说明书允许），建议安装保护柱（与分析柱同填料，寿命约为分析柱的 1/5），每分析 10–20 针样品更换保护柱芯。

• 日常维护与保存：

• 分析完毕后，先用高比例水相（如 90% 水 + 10% 甲醇）冲洗 30 分钟去除缓冲盐，再用纯甲醇 / 乙腈冲洗 60 分钟置换水相（流速 0.8–1.0 mL/min），防止微生物生长或疏水坍塌。

• 长期保存：反相柱用纯甲醇 / 乙腈封存，正相柱用正己烷封存，两端密封后垂直存放于阴凉处（避免阳光直射）。

• 柱效恢复技巧：

• 若峰展宽或拖尾，可尝试用梯度洗脱冲洗（如 10%→100% 乙腈，30 分钟），或用专用清洗剂（如 Agilent 柱再生试剂盒）按步骤处理。

• 蛋白污染可用 0.1 mol/L NaOH+30% 乙腈冲洗（注意 pH 范围，C18 柱通常耐受 pH 2–8）。

4. 检测器（以 UV 检测器为例）

• 流通池清洗：

• 每天实验结束后，用纯甲醇冲洗流通池 30 分钟（流速 0.5 mL/min），防止样品残留吸附在池壁。

• 若基线噪声大或出现鬼峰，可能是流通池污染，可注入 30% 硝酸溶液浸泡 1 小时，再用超纯水冲洗至中性，最后用甲醇封存。

• 光源维护：

• UV 灯寿命约 2000 小时（氘灯），避免频繁开关（每次开关相当于消耗 2 小时寿命），长期不用时每周开机预热 30 分钟。

• 定期检查灯能量（如 254 nm 处能量低于初始值的 50% 需更换），更换后需进行波长校正。

三、日常使用规范：减少损耗与故障

1.开关机顺序

• 开机：先开计算机和检测器，再开泵和进样器，最后启动工作站软件（按仪器品牌顺序，如 Agilent 先开泵，Waters 先开软件）。

• 关机：先将流速降至 0，关闭泵和检测器，用流动相平衡系统 30 分钟后退出软件，最后关闭电源（避免突然断电损坏电子元件）。

2.样品前处理

• 所有样品需过滤（0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜），避免固体颗粒堵塞进样针或色谱柱筛板。

• 生物样品（如血清、细胞裂解液）需先离心（10000 rpm，10 分钟）并取上清液，必要时用蛋白沉淀法（如加乙腈沉淀蛋白）预处理。

3.环境控制

• 实验室温度保持在 20–25℃（温差≤2℃/ 天），湿度 40%–70%，避免空调直吹仪器（防止冷凝水进入电路）。

• 仪器需接地良好，远离强电磁干扰源（如离心机、大功率电机）。

四、定期维护计划：预防性保养

五、常见故障预防与处理

1. 泵漏液：

• 原因：密封圈磨损、管路接口松动、流动相中有颗粒杂质。

• 处理：更换密封圈，检查管路并重新连接，过滤流动相。

2. 进样后无信号：

• 原因：进样针堵塞、检测器灯故障、流通池气泡。

• 处理：超声清洗进样针，更换氘灯，用甲醇冲洗流通池并排空气泡。

3. 保留时间漂移：

• 原因：柱温波动、流动相比例变化、色谱柱老化。

• 处理：检查柱温箱温控精度，校准泵的流量准确性，活化或更换色谱柱。

4. 基线漂移：

• 原因：流动相污染、检测器未平衡、柱温变化。

• 处理：重新配制流动相，延长检测器预热时间（至少 1 小时），稳定实验室温度。

总结

液相色谱仪的保养需遵循 “预防为主，治未病" 原则，重点关注流动相的纯净度、关键部件的清洁与润滑，以及严格的操作规范。通过定期维护和细致记录（如建立仪器保养台账，记录维护时间、更换部件、故障处理等），可显著降低故障率，延长仪器寿命，确保分析结果的准确性和重现性。

液相色谱仪的正确使用方法