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介绍一些肿瘤单细胞制备的其他方法

时间:2025-6-10阅读:65
肿瘤单细胞制备方法除了使用美天旎 Tumor Dissociation Kit 这种基于酶解的方法外,还有以下几种常见的方法:


  • 机械解离法

    • 操作方式:通过物理手段,如使用剪刀、镊子等器械将肿瘤组织剪碎,再利用研磨、匀浆等方式进一步破碎组织,使细胞分散。或者使用组织研磨器、匀浆器等仪器,对肿瘤组织进行机械研磨和匀浆处理,从而获得单细胞悬液。

    • 优缺点:优点是操作简单、成本低,不需要特殊的试剂。缺点是容易造成细胞损伤,细胞活性和得率较低,而且对于质地较硬的肿瘤组织,解离效果可能不佳。

  • 化学解离法

    • 操作方式:利用化学试剂破坏细胞间的连接,使肿瘤组织分散成单细胞。常用的试剂如胰蛋白酶、乙二胺四乙酸(EDTA)等。胰蛋白酶能够水解细胞间的蛋白质连接,EDTA 则可以螯合细胞外的钙离子,破坏细胞间的钙依赖连接。通常是将肿瘤组织切成小块,放入含有胰蛋白酶或 EDTA 的消化液中,在适宜的温度和时间条件下进行消化,使细胞解离。

    • 优缺点:优点是解离效率较高,能够快速获得大量单细胞。缺点是化学试剂可能对细胞表面抗原和细胞功能产生影响,而且消化时间和试剂浓度需要严格控制,否则容易导致细胞过度消化而死亡。

  • 流式细胞仪分选法

    • 操作方式:先将肿瘤组织制备成单细胞悬液,然后标记细胞表面的特异性抗原,使用流式细胞仪根据细胞的大小、粒度以及表面抗原的表达情况,对单细胞进行分选。通过流式细胞仪的激光检测和细胞分类装置,将不同特征的细胞分离开来,收集到特定的细胞群体,从而获得纯净的单细胞悬液。

    • 优缺点:优点是能够精确地分离出特定类型的肿瘤细胞,纯度高,可同时对多个参数进行分析和分选。缺点是仪器设备昂贵,操作复杂,需要专业人员进行操作,而且对于细胞悬液的质量要求较高,细胞浓度和活性会影响分选效果。

  • 微流控技术

    • 操作方式:利用微流控芯片,将肿瘤组织单细胞悬液引入芯片的微通道中。通过微通道内的物理结构和流体力学原理,实现单细胞的捕获、分离和培养。例如,利用微柱阵列、液滴微流控等技术,将单个细胞包裹在微小的液滴或微腔室中,实现单细胞的分离和培养。

    • 优缺点:优点是能够在微观尺度上精确操控细胞,实现高通量的单细胞分析,所需样本量少,对细胞的损伤小。缺点是芯片的制备和操作较为复杂,技术难度高,成本也相对较高,而且通量有限,难以处理大量的肿瘤组织样本。




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