本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定样本中 犬尿氨酸（KYN） 的含量。

实验原理

本试剂盒应用 酶联免疫竞争 法测定 标本 中 犬尿氨酸（KYN） 水平。用纯化的 犬尿氨酸（KYN） 抗体 包被微孔板，制成固相 抗 体，往包被 单抗 的微孔中加入 犬尿氨酸（KYN） ，和HRP标记的 犬尿氨酸（KYN） 抗原，使它们竞争结合 ，经过洗涤后 加 底物TMB显色。 样本 颜色的深浅和样品中的 犬尿氨酸（KYN） 的含量 呈 负 相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 犬尿氨酸（KYN） 的含量。

试剂盒组成

标本要求

1．标本处理：（1）水样   采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水 (5 ： 25 ： 70  V：V： V) 抽提 ，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，备查

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准孔中加50微升，待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品10 μ l（样品最终稀释度为5倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

2. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育6 0 分钟 。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂B50 μ l，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色15分钟.

7. 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

8. 测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

   计算

   以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。

   注意事项

   1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

   2． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

   3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

9. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后 乘以 总稀释倍数（ ×n×5 ）。

10. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物请避光保存。

    7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9．本试剂不同批号组分不得混用。

    检测范围：

    0.5 μmol/L - 28 μmol/L

    规格：

    96份/盒

    保存条件及有效期

    1． 试剂盒保存： 2-8 ℃ 。

    2．有效期：6个月