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ELISA实验间接法试剂及试剂配制
阅读:349 发布时间:2023-2-15ELISA实验间接法试剂及试剂配制:
1.
抗原及酶标记抗体
①抗原: IgG
②
酶标抗抗体:羊抗鼠
IgG-HRP
2.包被液(CBS):Na2CO3 0.8g,NaHCO3 1.46g,水溶解,定容500ml。
3.
封闭液(3%BSA+CBS或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g
BSA。含5%荷兰牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。
4.洗涤液(PBST 10*):KH2PO4 4g,Na2HPO4·12H2O 58g,NaCl 160g, KCl 4g,Tween-20 10mL
加水定容2L。
5.洗涤液(1*PBS):PBST:H2O=1:9
6.
底物溶液(4甲基酰苯氨)
①TMB底物缓冲液(0.005mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液):称NaAc·3H2O:1.13g,C6H8O7·H2O:1.05g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,调PH=3.6。
② TMB底物液:称3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)0.08g
溶于40mL二甲基亚砜(DMSO)中,加60 mL甲醇,混匀,加100mL底物缓冲液,在暗处避光搅拌2小时至溶解,4℃避光保存。
③H2O2底物液:取140μL过氧化氢(H2O2)加入200mL底物缓冲液混匀。
④
底物应用液:现用现配,TMB:H2O2=1:1混匀。
7. 终止液:2mol/L H2SO4