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原代细胞培养基本流程

阅读:163          发布时间:2024-5-27

原代细胞可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA,可转染绝大多数原代细胞。目前,无论国外还是国内,原代细胞的核酸转染都是个热点难题,市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。原代细胞能够高效转染绝大多数原代细胞,获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫,也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞,RFect PM 细胞转染阳性率都在 80%以上,而转染细胞死亡率不到 10%。

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原代细胞培养基本流程:

1、器官和组织的选择

尽可能的去除不必要的组织和血迹。


2、原代细胞的分离

(1)应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。

(2)根据组织来源不同,可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。


3、原代细胞的培养:

(1)PriCells原代细胞特制培养基

(2)PriCells原代细胞特制添加物

(3)优质胎牛血清


4、细胞的培养和鉴定:

PriCells原代细胞鉴定试剂盒


4、原代细胞的传代、保存

(1)传代:依椐细胞的生长状态,生长的细胞1:2或1:3进行传代。

(2)保存:DMSO+培养液+血清

按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃过夜)→液氮。


5、原代细胞的复苏

(1)取出细胞,迅速放入37℃温水中快速解冻。

(2)吸出细胞悬液,并加10倍以上培养液。

(3)用培养液适当稀释后接种培养瓶,放入37℃CO2培养箱静置培养。



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