细胞免疫荧光 主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点，是目前比较常用的组织学技术，也是比较精确的。 在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。

细胞爬片免疫荧光实验技术具体步骤:
第一天：
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；
2. 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室温通透 20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；
4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭 30 min；
5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃ 孵育过夜；

第二天：
6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 20-37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 minx4 次洗去多余的 DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

注意事项  :
1. 取细胞爬片时，动作应轻柔，防止将细胞爬片夹碎，影响实验进程。
2. 种细胞过程中，要注意将细胞轻柔混匀，「八」字或者「十」字形摇晃，防止细胞局部生长过密。