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植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)酶联免疫分析酶活试剂盒
阅读:1444 发布时间:2018-7-23提 供 商 | 上海臻科生物科技有限公司 | 资料大小 | 157.5KB |
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植物 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 酶联免疫分析 酶活 试剂盒
本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶
(NCED) 活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 水
平。用纯化的植物 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,
往包被单抗的微孔中依次加入植物 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) ,再与 HRP 标记
的 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经
过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转
化成 zui 终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物 9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 呈正
相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中植物 9- 顺
式环氧类胡萝卜素双加氧酶 (NCED) 活性浓度。
植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)酶联免疫分析 酶活 试剂盒 组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶
2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 标准品( 800U/L ) 0.5ml × 1 瓶
3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶
4 样品稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于 -20 ℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。
植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)酶联免疫分析 酶活 试剂盒 操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
400U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
200U/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
100U/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
50U/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
25U/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ,
然后再加待测样品 10μl (样品 zui 终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3 。
8. 洗涤:操作同 5 。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)酶联免疫分析 酶活 试剂盒 注意事项
1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 zui 好
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4 . 请每次测定的同时做标准曲线, zui 好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计
算时请 zui 后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5 . 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6 .底物请避光保存。
7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9 .本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1 .试剂盒保存:; 2-8 ℃。
2 .有效期: 6 个月