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人碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

阅读:1165          发布时间:2018-7-30
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人碱性磷酸酶 (ALP) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

本试剂盒用于测定人细胞中碱性磷酸酶 (ALP) 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人碱性磷酸酶 (ALP) 水平。用纯化的人碱性磷酸

(ALP) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入碱性磷酸酶 (ALP)

再与 HRP 标记的碱性磷酸酶 (ALP) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经过*洗

涤后加底物 TMB 显色。 TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成 zui

的黄色。颜色的深浅和样品中的碱性磷酸酶 (ALP) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定

吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中人碱性磷酸酶 (ALP) 浓度。

人碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫分析试剂盒 组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 7 终止液 6ml × 1

2 酶标试剂 6ml × 1 8 标准品( 240 U/L 0.5ml × 1

3 酶标包被板 12 孔× 8 9 标准品稀释液 1.5ml × 1

4 样品稀释液 6ml × 1 10 说明书 1

5 显色剂 A 6ml × 1 11 封板膜 2

6 显色剂 B 6ml × 1/ 12 密封袋 1

标本要求

1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于 -20 ℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。

人碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫分析试剂盒 操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

120 U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

60 U/L 4 号标准品 150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

30 U/L 3 号标准品 150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

15 U/L 2 号标准品 150μl 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

7.5 U/L 1 号标准品 150μl 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl

然后再加待测样品 10μl (样品 zui 终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3

8. 洗涤:操作同 5

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结:

计算

以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

人碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫分析试剂盒 注意事项

1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 zui

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4 . 请每次测定的同时做标准曲线, zui 好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD

大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计

算时请 zui 后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5 . 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6 .底物请避光保存。

7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 .本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1 .试剂盒保存:; 2-8 ℃。

2 .有效期: 6 个月

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