兔γ干扰素（IFN-γ） ELISA 试剂盒厂家直供

本试剂盒用于体外定量检测 血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本 中 兔γ干扰素（IFN-γ） 的含量。

有效期：6个月

保存条件： 2 -8℃

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。 往预先包 被 兔γ干扰素（IFN-γ） 捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的 兔γ干扰素（IFN-γ） 呈 正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理和要求

1. 血清 ： 将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4 ℃ 过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20 ℃ 或-80 ℃ 保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆 ： 用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8 ℃  1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 ℃ 或-80 ℃ 保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆： 用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本： 请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提到的试剂和器材

1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成

名称	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	8 孔× 12 条	8 孔× 6 条	无
标准品	0. 3 mL*6管	0. 3 mL*6管	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物A	6mL	3mL	无
底物B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

备 注 ：

1. 标准品浓度依次为： 800 、400、200、100、50、25 pg/mL

2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50 μL 样本上样即可。当有部分样本值超过大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

注意事项

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。