产品展厅 收藏该商铺

您好 登录 注册

当前位置:
上海臻科生物科技有限公司>资料下载>植物玉米黄质环氧化酶(ZEP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

资料下载

植物玉米黄质环氧化酶(ZEP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

阅读:987          发布时间:2019-4-22
提 供 商 上海臻科生物科技有限公司 资料大小 92KB
资料图片 查看 下载次数 346次
资料类型 WORD 文档 浏览次数 987次
免费下载 点击下载

植物玉米黄质环氧化酶 ZEP 酶联免疫 分析( ELISA )

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定植物组织、细胞及相关液体样本中玉米黄质环氧化酶(ZEP)的含量。

实验原理

本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 植物玉米黄质环氧化酶(ZEP) 水平。用纯化的 植物玉米黄质环氧化酶(ZEP)捕获抗体 包被微孔板,制成固相 体,往包被的微孔中依次加入 植物玉米黄质环氧化酶(ZEP) ,再与HRP标记的 检测 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ,经过*洗涤后 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的 植物玉米黄质环氧化酶(ZEP) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度(OD值), 通过标准曲线 计算样品 植物玉米黄质环氧化酶(ZEP) 含量

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

封板膜

2片

2片

密封袋

1个

1个

酶标包被板

1 ×48

1 ×96

2-8℃保存

标准品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

2-8℃保存

酶标试剂

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20 × 浓缩洗涤液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

注:标准品浓度依次为: 1000 、500、250、125、62.5、0 pg/ml .

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 ℃保存,但 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

  • 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品10 μ l(样品终稀释度为5倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀
  • 加酶:每孔加入酶标试剂100 μ l,空白孔除外
  • 温育:用封板膜封板后置37 ℃温育6 0 分钟
  • 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50 μ l,再加入显色剂B50 μ l,轻轻震荡混匀,37 ℃避光显色15分钟.
  • 终止:每孔加终止 液50μl,终止反应 (此时蓝色立转黄色)
  • 测定:以空白孔调零, 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项:

  • 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  • 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出,稀释时可在水浴中加温助溶 ,洗涤时不影响结果。
  • 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  • 请每次测定的同时做标准曲线, 做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后 乘以 总稀释倍数(×n×5)。
  • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  • 底物请避光保存。
  • 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  • 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  • 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以 稀释

倍数 ;或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以 稀释

倍数 ,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

检测范围:

31.25 pg/ml  -  1000 pg/ml

灵敏度:

低检测浓度小于1.0 pg/ml

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存: 2-8

2.有效期: 6个月

收藏该商铺

登录 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~

对比框

产品对比 产品对比 联系电话 二维码 意见反馈 在线交流

扫一扫访问手机商铺
021-55088839
在线留言