草莓皱缩病毒（SCrV） 酶联免疫 分析

试剂 盒使用说明书

使用目的：

本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关样本中草莓皱缩病毒（SCrV）水平。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 草莓皱缩病毒（SCrV）表达 。用纯化的 草莓皱缩病毒（SCrV）抗体 包被微孔板，制成固相抗 体 ， 可与样品中 草莓皱缩病毒（SCrV） 相结合 ， 经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后 再与HRP标记的 草莓皱缩病毒（SCrV）抗体 结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（OD值） ，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中 草莓皱缩病毒（SCrV） 的存在与否。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml ×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	阳性对照	0.5ml×1瓶
3	酶 标包被 板	12孔×8条	9	阴性对照	0.5ml×1瓶
4	样品 稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml ×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

• 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、 阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
• 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50 μl 。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液40 μl ，然后再加待测样品10 μl 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀，
• 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。
• 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。
• 温育：操作同3。
• 洗涤：操作同5。
• 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂B50 μ l，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色10分钟.
• 终止：每孔加终止 液50μl，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。
• 测定：以空白孔调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算和结果判定：

 试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥ 1.00; 阴性对照平均值 ≤ 0.10

  临界值（CUT OFF）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值 <  临界值（CUT OFF）者为 草莓皱缩病毒（SCrV） 阴性

  阳性判定：样品OD值 ≥  临界值（CUT OFF）者为 草莓皱缩病毒（SCrV） 阳性

。

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期：6个月