羊小反刍兽疫病毒抗体ELISA检测试剂盒

使用说明书

【产品名称】

通用名：羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名： Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ ELISA ）

【包装规格】 96T × 1/ 盒、 96T × 2/ 盒

【预期用途】 小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（ Peste des Petits Ruminants Virus ， PPRV ）引起的一种急性接触性传染病，其特征为口腔、舌粘膜糜烂、流泪、流鼻液。本病的易感动物为山羊，也可感染绵羊、白尾鹿等，但对牛无感染性。

本试剂用于检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体， 可用于 小反刍兽疫 疫苗免疫效果评价 。

【原 理】

本试剂盒系由预包被小反刍兽疫病毒重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ ELISA ）原理检测羊血清、血浆样本中小反刍兽疫病毒抗体。实验时在 酶标 板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有小反刍兽疫病毒抗体，则将与 酶标 板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与 酶标 板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加 TMB 底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在 450nm 波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有小反刍兽疫病毒抗体。

【试剂盒组成】

序号	名称	规格（ 96T × 1 ）	规格（ 96T × 2 ）
1.	酶标板	96T × 1	96T × 2
2.	酶标记物   ( 红盖 )	11ml × 1	11ml × 2
3.	样品稀释液  ( 黄盖 )	50ml × 1	50ml × 1
4.	20X 浓缩洗涤液	40ml × 1	40ml × 1
5.	底物液 A  ( 白盖 )	6ml × 1	11ml × 1
6.	底物液 B  ( 黑盖 )	6ml × 1	11ml × 1
7.	终止液   ( 黄盖 )	6ml × 1	11ml × 1
8.	阳性对照   ( 红盖 )	1.0 ml × 1	1.5 ml × 1
9.	阴性对照   ( 绿盖 )	1.0 ml × 1	1.5 ml × 1
10.	盖板膜	1 张	2 张
11.	自封袋	1 个	1 个
12.	说明书	1 份	1 份

【储存及有效期】 储存 于阴凉干燥处（ 2-8 ℃），有效期期 12 个月。

包被板开封后请于 2 ～ 8 ℃避光保存，避免受潮。使用期限为 2 个月。

【适用仪器】 含 450nm 、 630nm 波长的酶标仪， 37 ℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1. 取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品 1 周内可于 2 ～ 8 ℃保存，长期需置 -20 ℃保存。

2. 用样品稀释液将待检血清按 40 倍稀释（如 5 μ l 血清加入 195 μ l 样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3. 浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释。

【检验方法】

1. 使用前将试剂盒置室温 30 分钟，恢复至室温。

2. 取所需用量 酶标 板条，设空白对照 1 孔、阴性 / 阳性对照各 2 孔，未用的板条尽快密封， 2 ～ 8 ℃保存。

3. 空白对照孔加样品稀释液 100 μ l ；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 100 μ l ；样品孔每孔加入稀释后的样品 100 μ l 。

4. 混匀，置 37 ℃（推荐水浴）反应 30 分钟。

5. 扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，拍干。

6. 每孔加酶标记物 100 μ l （空白孔除外）。置 37 ℃反应 30 分钟。

7. 洗涤，同步骤 5 。

8. 每孔依次加底物液 A 、底物液 B 各 50 μ l ，混匀， 37 ℃避光反应 10 分钟。

9. 每孔加终止液 50 μ l ，混匀，用空白孔调零，于 450nm( 可用 630nm 作参比波长）测定各孔吸光值（ A 值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤ 0.10 ，阳性对照≥ 0.6 。

【检验结果的解释】

1. 样品 A 值 ≥ 0.38 为阳性；样品 A 值在 0.2 到 0.38 之间为可疑；样品 A 值＜ 0.2 为阴性。

2. 本实验结果为阴性或可疑时表明羊只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测 羊血清、血浆中小反刍兽疫病毒抗体 ，根据 A 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估 。

【注意事项】

1. 实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2. 终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3. 酶标 板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的 酶标 板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4. 浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以*溶解。

5. 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6. 用于检测的样品应保持新鲜。

7. 试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8. 不同批号试剂组分不得混用。