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单克隆培养的原理介绍

阅读:2928        发布时间:2020-7-20
单克隆培养对增殖力比较强的细胞操作起来的确比较适合,但增殖较慢的细胞也不是不可以,至于稀释到每孔只有1~2细胞,细胞稀释的密度要取决你每孔所加的培养液体积,一般说来保证每孔内平均细胞数为0.5个即可,稀释并加入培养孔后,在显微镜下观察,将只有一个细胞的孔标记出。
  经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体,克隆的时间一般说来越早越好,因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能,但克隆时间也不宜太早,太早细胞性状不稳定,数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞,经过一段时期培养之后,也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失,使部分细胞丧失产生抗体的能力,所以需要再次或多次克隆化培养。
单克隆培养原理:将细胞经荧光抗体染色后,经喷嘴形成单个细胞的线形液滴,荧光素发射荧光,此信号由光电倍增管接收,再结合细胞形态大小产生光散射信号,经电脑处理,产生信号并与预定的信号对比,根据细胞荧光强度及细胞大小不同,将细胞分成不同级别,在电场中发生偏离,而分别收集于不同容器中。

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