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关于单克隆筛选的前沿技术，你了解多少？
阅读：496 发布时间：2022-11-17
生物药开发是一个非常复杂的过程，而构建适用于工业生产的高表达的稳定细胞株是生物药工艺开发的起点和基础，后续开发、临床前和临床工作都是基于某一确定的细胞株进行开展。
与此同时，细胞株产量会影响到生产的成本，质量会影响到药物的安全性和有效性。因此，细胞的单克隆筛选在确保生物制药产品的纯度和均一性上至关重要。
进行单克隆筛选是为了减少细胞库的异质性，减少单克隆细胞筛选的复杂流程，保持生产过程的一致性和可预见性，确保产品的产量和质量在预设的范围内。
常见的单克隆获取方法：
目前常见的单克隆获取方法主要包括以下三个：有限稀释法、高通量细胞系筛选仪和流式细胞荧光分选技术。
一、有限稀释法：
有限稀释法是传统的挑选单克隆的方法，该方法操作简单，对仪器设备的需求比较低，并且方便与成像系统关联使用。因此，是目前应用比较多的单克隆挑选方法。
一般要求铺板密度在0.5cell/well或以下，操作简单但是耗时较长。另一个缺点是效率比较低，需要在大量的96孔板或者384孔板中进行挑选才有可能获得理想的克隆（一般需要在不低于1000个克隆中挑选）。
二、高通量细胞系筛选仪：
高通量的单克隆筛选设备，是在半固体培养基中使用机器进行筛选。相对于有限稀释法，单克隆筛选设备使用半固体培养基，应用荧光显色的方法挑选高表达克隆，因此具有人工干预少、通量大、效率高的优点。
但是这种设备也有不足。有限稀释法的单克隆培养基与后期工艺培养基更为接近，克隆在孔板的表现更接近在生产过程中的表现。此外，高通量细胞单克隆筛选设备价格较为昂贵，难以在普通企业中采用该方法。
三、流式细胞荧光分选技术（FACS）：
FACS法的原理是根据细胞大小、荧光染料和细胞表面marker等因素挑选出所需要的单细胞，当前广泛应用于单细胞分离，稀有细胞分选等多项研究中。一般而言，该法可用于鉴定、分离具有高水平膜蛋白表达的细胞。
使用FACS法，单克隆形成率很高，并且FACS法可以和单克隆成像系统连用，确定单克隆。但在没有成像系统辅助的情况下，一般认为单纯的一轮筛选是不够的，可以通过有限稀释法挑选亚克隆来增加单克隆率。
缺点是在整个筛选过程中，细胞的形态及状态会对条件和分离效果产生影响，流式细胞仪在分选过程中也可能会对细胞状态有一定影响。