本试剂盒仅供科研使用

果胶酯酶（ pectinesterase ， PE ）试剂盒说明书

（货号： WS7070D 48 样）

一、产品简介： 果胶酯酶，属果胶酶系，亦称果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子 物质果胶酸和甲醇 , 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌 中，起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用。 果胶酯酶（ PE ）催化水解果胶分子释放 H+ ，使反应体系的 pH 下降，用碱液维持体系的 pH 始终保持在 7.8( 酚 酞指示剂维持在粉红色 ) ，通过碱消耗的 NaOH 量反映果胶酯酶的活性。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 80mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 瓶 4 ℃保存 临用前加 12.5mL 蒸馏水于试剂瓶（ 50 ℃ 加热溶 解），冷却后转入 250mL 容量瓶，并定容至 250mL 。 试剂二 粉剂 mg×1 支 4 ℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部，再加 1.5mL 乙醇溶 解备用。 试剂三 液体 15mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂四 液体 25mL×1 瓶 4 ℃保存 三、所需仪器和用品： 天平、研钵、离心机、水浴锅或恒温培养箱。 四、果胶酯酶（ PE ）的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1 、样本制备： ① 组织样本：取 0.5g 组织样品（叶片类样本可取 0.15g ），加 1.5mL 提取液冰浴研磨， 12000rpm 、 4 ℃离心 15min ，取全部上清液待测。 【注】：若酶活力太高，可降低样本取样质量 W 或将上清液稀释 2-5 倍后再进行测定，并在计算公式 中乘以稀释倍数 D 。 ② 细菌 / 培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或 细胞加入 1.5mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20 ％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）； 12000rpm ， 4 ℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（ 10 4 个）：提取液体积（ mL ）为 500 ： 1 的比例进行提取。 2 、上机检测： ① 试剂一于 37 ℃烘箱保温 10min 。 ② 取出 1mL 的上清液转移至离心管或试管中。 ③ 向离心管或试管中依次加 25μL 试剂二， 4mL 试剂一，混匀，并用试剂三调 pH 至 7.8 （粉 红色）。 ④ 将离心管或试管于 37 ℃（水浴锅或恒温培养箱）孵育 60min 。每隔 20 分钟用试剂四调 节 pH ，使其维持在 7.8 （粉红色）。同时记录所消耗的试剂四的体积 V2 （ mL ）。 五、结果计算： 1 、按照样本质量计算： 酶活定义：每克组织每小时消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 U 。 PE 活性 (μmoL/min/g)=20×V2÷(V1÷V×W) ÷T×D =30×V2÷W×D 2 、按照蛋白浓度计算： 本试剂盒仅供科研使用 2 酶活定义：每毫克蛋白每小时消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 U 。 PE 活性 (μmoL/min/mg prot)=20×V2÷(V1÷V×Cpr)÷T×D =30×V2÷Cpr×D 3 、按细菌 / 细胞密度计算： 酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每小时消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 U 。 PE 活性 (μmoL/min/ 10 4 cell )=20×V2÷(V1÷V×500)÷T×D =0.06×V2×D V1--- 加入离心管或试管中的上清液体积， 1mL ； V--- 提取液体积， 1.5mL ； V2--- 滴定所消耗的试剂四的量， mL ； T--- 反应时间， 60 min=1h ； D--- 样品稀释倍数； W--- 样品质量， g ； 20--- 试剂四的 NaOH 浓度， 20μmol/mL ； 500--- 细菌或细胞总数， 500 万； Cpr---- 上清液蛋白质浓度（ mg/mL ），建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。