外泌体相关技术服务平台介绍
外泌体 (Exosome) 是直径约为 30-150nm ，密度在 1.13-1.21g/ml 的小囊泡。 Exosome 天 然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，是活细胞分泌的来源于晚期核内体 ( 也称 为多囊泡体 ) 的膜性囊泡。 研究发现， Exosome 内含有与细胞来源相关的蛋白质 rRNA 和 microRNA ，并且 exosome 能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能。 一、外泌体分离提取服务： 本公司可提供差速超速离心法和试剂盒法分离外泌体。可分离细胞上清、血液、脑 脊液、肺泡灌洗液、尿液、胆汁、腹水、唾液、羊水以及动植物组织样本来源的外泌体。 2 种分离方法特点如下： 差速超速离心法： 最*用的外泌体纯化方法。差速超速离心法操作简便，所获得的囊泡 纯度高、杂质少。但所需样品较多，产率低于试剂盒法。自有平台，快速高效，随时预约， 周期一般 1-3 个工作日。 试剂盒法： 操作简便，外泌体产率高，所需要的样品体积较少。 低温超速离心机 Thermo WX100 二、外泌体电镜鉴定技术服务： 2.1 、电镜下，外泌体多为茶托形或一侧凹陷的半球形。想要获得比较好的电镜数据， 除高质量外泌体样品外，按样品摸索合适的上机条件后尽快制样上机。自有的电镜平台，专 业提供外泌体电镜鉴定技术服务。 电镜平台搭载真实 2000 万像素的 coms 相机，感光度更 高，照片清晰度大大超出常规电镜。 结合本公司 NTA 测试平台，可以更好的把握样品浓度 及上机条件。多年来，已经拍摄过数千例各种来源的外泌体样品。质量及周期均可靠，受到 广大客户一*好评！ JEOL 品牌 JEM 1400 型透射电镜 2.2、外泌体免疫电镜技术服务 在透射电镜基础上，对外泌体标志蛋白进行免疫标记，利用胶体金标记出外泌 体标志蛋白的空间位置，结合了透射电镜表征和免疫学原理。这样数据结果既 可以获得经典形态的外泌体形态，又可以定性及定位外泌体表面的标志蛋白。 可以作为文章的加分项！ 三、外泌体粒径检测技术服务： 平台提供外泌体浓度及粒径检测技术服务，平台采用德国 Particle Metrix 公司的 ZetaView 粒度仪，可对样品进行高质高效检测。 外泌体样品有其特殊性， 4 ℃下，会逐渐降解并失去生物活性。所以，我司 NTA 检测平 台严格要求检测时间，到样 1-2 个工作日出具检测报告。确保准确性及时效性。有特殊要求 的客户可加急处理， 最快当天到样，当天检测，当天即可出具报告！ 德国 Particle Metrix 公司的 ZetaView 粒度仪 四、外泌体 WB 鉴定服务： 外泌体阳性指标主要包括：CD9,CD63,CD81,TSG101，syntenin。阴性对照指标为：Calnexin （内 质网蛋白）。常规选择 2 个阳性和 1 个阴性指标。公司提供上述指标对应一抗及二抗，特殊抗 体需由客户自己提供。实际操作中，阳性蛋白分子量并不固定，以实际情况为准。另外，外泌体 WB 检测有其特殊性，部分指标可能不出，或表达量很高。做出*美条带可能需要反复调试浓度。 我们会保留对应原始数据照片及转膜图片，不保证 WB 实验成功，且需要按实际操作次数收费。 五、外泌体检测服务-QPCR 检测 检测范围包括：mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、DNA 等 六、外泌体共孵育实验 1 、实验介绍 外泌体与细胞共孵育培养时，细胞可以通过胞吞过程吞噬外泌体，外泌体包裹的核酸、蛋白质 及其他分子会释放出来，从而影响细胞的功能变化。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类 型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。 2 、实验流程 外泌体提取和纯化外泌体浓度测定 外泌体荧光标记（ PKH67/PKH26 染色） 荧光外泌体纯化 荧光外泌体浓度标记 外泌体-细胞共孵育培养实验 细胞功能学检测（周期、凋亡、克隆形成、侵袭、转移等）细胞基因表达检测（qPCR、Western blot、Elisa 检测等） 八、外泌体 MicroRNA 测序及蛋白质组学技术服务 平台有着多年的二代、三代测序 及蛋白质组学服务经验。相关的实验平台及服务经验丰富，团队技 术实力雄厚，合作开展相关业务。 1 、外泌体 MicroRNA 测序 实验内容：外泌体提取、纯化建库 + 全转录组测序基础数据分析 升级服务：高级数据分析 2、外泌体蛋白组学技术服务 实验内容：外泌体总蛋白提取，labelfree 非定量质谱检测蛋白组学； 升级服务：质谱个性化分析