本试剂盒仅供科研使用
γ- 氨基丁酸（ GABA ）含量试剂盒说明书
（货号： WS6011W 微板法 96 样） 一、产品简介： 4- 氨基丁酸（ GABA ）广泛分布在动植物体中。在动物体内 GABA 几乎只存在于神经 组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 G A B A ， 且与植物的环境应激反应有关。 4- 氨基丁酸（ GABA ）在碱性溶液中与次氯酸盐和苯酚反应生成蓝绿色物质，通过检 测该有色物质在 645nm 波长处的值，即可得出样本中 GABA 的含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂一 液体 40mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂二 液体 10mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂三 液体 20mL×1 瓶 4 ℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4 ℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、 96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、 γ- 氨基丁酸（ GABA ）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1 、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1mL 提取液，在冰上进行匀浆， 12000rpm ， 4 ℃或室温离心 10min ，取上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（ g ）：提取液 (mL) 为 1 ： 5~10 的比例进行提取。 ② 细菌 / 细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）； 12000rpm 4 ℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌 / 细胞数量（ 10 4 ）：提取液（ mL ）为 500~1000 ： 1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2 、上机检测 ： ① 酶标仪预热 30 min ，调节波长到 645 nm 。 ② 所有试剂解冻至室温（ 25 ℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（ μL ） 测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 30 330 试剂二 100 试剂三 200 混匀，沸水浴（ 95-100 ℃） 10min ，冰浴至室温，呈现蓝绿 色颜色，若浑浊需 12000rpm 离心 5min ，取澄清的 200μL 本试剂盒仅供科研使用 2 至 96 孔板中，于 645nm 处读取各管的 A 值。△ A=A 测定 -A 对照（每个样本需做一个自身对照）。 【注】1.若测定管的 A 值大于 0.6，则需将样本进行稀释（用蒸馏水稀释），稀释 倍数 D 需代入计算公式重新计算。 2.若 A 测定-A 对照的差值在零附近徘徊，则可增加样本取样量（如增至 0.2g）， 则取样质量 W 代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1 、标准曲线： y = 0.0102x - 0.0003 ， x 为标准品质量 (μg) ， y 为吸光值 ΔA 。 2 、按样本质量计算 : GABA 含量 (μg/g 重量 )=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(W×V1÷V)×D =1960.8×(ΔA+0.0003) ÷W×D 3 、按细胞数量计算： GABA 含量 (μg/10 4 cell)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(500×V1÷V)×D =3.922×(ΔA+0.0003)×D 4 、液体中 GABA 含量计算： GABA 含量 (μg/mL)=[(ΔA+0.0003) ÷0.0102]÷V1×D=1960.8×(ΔA+0.0003)×D V--- 提取液体积， 1mL ； V1--- 样本加入体积， 0.05mL ； D--- 稀释倍数，未稀释即为 1 ； W--- 样本取样质量； 500--- 细胞数量，万。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（ 2mg/mL ）：标准品临用前加 1mL 蒸馏水溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品： 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL 。也可根据实际样本来调整 标准品浓度。 3 按照测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。