本试剂盒仅供科研使用
胃蛋白酶（ Pepsin ）试剂盒说明书 ( 货号： WS0121W 微板法 48 样 )
一、产品简介： 胃蛋白酶（ Pepsin ）是一种消化性蛋白酶， 由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白 质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等 症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝 色；其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 50mL × 1 瓶 4 ℃保存 试剂一 液体 5mL × 1 瓶 4 ℃保存 试剂二 粉体 mg × 2 瓶 4 ℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部，每瓶 再加 13mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 15mL × 1 瓶 4 ℃保存 试剂四 液体 3mL × 1 瓶 4 ℃保存 标准品 粉体 mg × 1 支 4 ℃保存 临用前加 2mL 提取液，再用蒸馏水稀 释 10 倍，即为 0.05mg/mL 酪氨酸。
三、所需的仪器和用品： 酶标仪、 96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、胃蛋白酶活性测定： 1、样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4 ℃ × 3500rpm 离心 5min ，取上清， 置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（ g ）：提取液体积 (mL) 为 1 ： 5~10 的比例 进行提取 ② 液体样本：液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后， 4 ℃× 3500rpm ，离心 5min ， 取上清液检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm 。 ② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（ μL ） 测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 50 本试剂盒仅供科研使用 2 37 ℃孵育 5min 试剂二 250 250 37 ℃孵育 10min 试剂一 50 37 ℃孵育 5min 后， 3000rpm 离心 5min ，上清液待测。 ④ 显色反应，在 EP 管中： 试剂名称（ μL ） 测定管 对照管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 上清液 30 30 标准品 30 提取液 30 试剂三 150 150 150 150 试剂四 30 30 30 30 37 ℃孵育 20min 后（若浑浊则室温 3000rpm 离心 5min ），取 200μL 至 96 孔板中，于 680nm 处测定，读取吸光值 A 。Δ A=A 测定 -A 对照（每个样 本做一个自身对照）。 【注】 1. 若 ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T （如 37 ℃孵育 10min 延长至 20min ）或增加样本 量 V1 （如增至 100μL ，则试剂二相应减少），则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计 算公式重新计算。 2. 若 A 测定值大于 1.5 ，可以减少样本量 V1 （如减至 20μL ，用提取液相应补充），则改变后的 样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1 、按样本蛋白浓度计算： 酶活定义： 37 ℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位 (U) 。 胃蛋白酶（ U/mg prot ） =[ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） ×C 标准 ×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） ÷Cpr 2 、按样本鲜重计算： 酶活定义： 37 ℃每 g 组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位 (U) 。 胃蛋白酶（ U/g 鲜重） =[ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） ×C 标准 ×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） ÷W 3 、液体 LAP 活力的计算 : 酶活定义： 37 ℃每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位 (U) 。 胃蛋白酶（ U/mL ） =[ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） ×C 标准 ×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷ （ A 标准 -A 空白） V--- 加入提取液体积， 1 mL ； V1--- 加入样本体积， 0.05mL ； V2--- 第③歩反应总体积， 0.35mL ； T--- 反应时间， 10min ； C 标准 ---50μg/mL ； W--- 样本质量， g ； Cpr--- 样本蛋白质浓度， mg/mL ；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒