本试剂盒仅供科研使用
漆酶（ Laccase ）试剂盒说明书 （货号： WS1450W 微板法 96 样）
一、产品简介： 漆酶（ EC 1.10.3.2 ）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌 和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维 素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。 漆酶分解底物 ABTS 产生 ABTS 自由基，在 420nm 处的吸光系数远大于底物 ABTS ， 测定 ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
二、试剂盒组分与配制 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂一 液体 12mL×1 瓶 4 ℃保存 试剂二 粉剂 ×1 瓶 4 ℃保存 临用前甩几下，使粉剂落到底部， 再加 5.5mL 蒸馏水充分溶解， 4 ℃ 保存一周，若变色则不能使用。
三、所需的仪器和用品： 酶标仪、 96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、恒温水浴锅。
四、漆酶活性检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1 、样本制备 ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 12000rpm ， 4 ℃离心 10min ，取 上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（ g ）：提取液体积 (mL) 为 1 ： 5~10 的比例进行提取 ② 细菌 / 细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液，冰 浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min ）； 12000rpm ， 4 ℃ 离心 10min ，取上清置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌 / 细胞数量（ 10 4 ）：提取液（ mL ）为 500~1000 ： 1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。 2 、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm 。 ② 在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（ μL ） 测定管 样本 30 试剂一 120 试剂二 50 25 ℃，立即于 420nm 处读取吸光值 A1 ， 反应 5min 后读取 A2 ， △ A=A2-A1 。 【 注 】 若△ A 差值较小，可增加样本量 V1 （如由 30μL 增至 60μL ，则试剂一相应减少） 或延长反应时间 T （如由 5min 增至 15min ），则改变后的样本体积 V1 和反应 时间 T 则代入计算公式重新计算。 本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1 ．按照蛋白浓度计算 : 酶活定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性 (nmol/min/mg prot)=[ △ A÷(ε×d)×V2×10 9 ]÷(V1×Cpr)÷T=74.07× △ A÷Cpr 2 ．按照样本质量计算 : 酶活定义：每克样品每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性 (nmol/min/g 鲜重 )=[ △ A÷(ε×d)×V2×10 9 ]÷(W×V1÷V)÷T=74.07× △ A÷W 3 ．按照细胞数量计算 : 酶活定义：每 10 4 个细胞每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性 (nmol/min/10 4 cell)=[ △ A÷(ε×d)×V2×10 9 ]÷( 细胞数量 ×V1÷V)÷T =74.07× △ A÷ 细胞数量 4 ．按照液体体积计算 : 酶活定义：每毫升液体每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶活性 (nmol/min/mL)=[ △ A÷(ε×d)×V2×10 9 ]÷V1÷T=74.07× △ A ε---ABTS 摩尔消光系数： 36×10 3 L/mol/cm ； d---96 孔板光径， 0.5cm ； V2--- 反应总体积， 0.2mL=2×10 -4 L ； V1--- 反应中样本体积， 0.03mL ； V--- 加入提取液体积， 1mL ； W--- 样本质量， g ； T--- 反应时间， 5min ； Cpr ：样本蛋白浓度， mg/mL ；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。