一、技术方案

1. 细胞培养与耐药性诱导
MCF7/DDP细胞通过逐步增加顺铂剂量（最大耐受浓度达5 μg/mL）结合间歇冲击法诱导建立，具备稳定耐药性。

• 培养条件：使用RPMI-1640培养基（含10% FBS），37℃、5% CO₂环境，贴壁生长，传代比例1:2-1:6，每周换液2-3次。

• 冻存方案：90%基础培养基+10% DMSO，液氮长期保存。

2. 耐药性验证与机制分析

• IC50测定：MCF7/DDP细胞对顺铂的IC50为3.602 ± 0.011 μg/mL，较母细胞（1.501 ± 0.026 μg/mL）耐药性提升2.4倍。

• 耐药基因检测：qPCR及Western blot验证ABC转运蛋白（如MDR1、BCRP）及DNA修复基因（BRCA1、RAD51）表达上调。

• 药物蓄积实验：HPLC显示耐药细胞内顺铂浓度显著低于敏感细胞（P<0.01）。

二、实验案例

1. 基因功能研究：RSR1与耐药性调控

• RSR1高表达：MCF7/DDP细胞中RSR1蛋白及mRNA水平显著高于母细胞（P<0.01），敲降RSR1后细胞增殖抑制率提升（P<0.001），G2/M期阻滞及凋亡率增加（P<0.05）。

• 动物模型验证：RSR1敲降组小鼠肿瘤体积显著缩小（P<0.01）。

2. lncRNA PART1沉默增强顺铂敏感性

• 凋亡调控：沉默PART1后，顺铂处理的MCF7/DDP细胞凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3表达上调（P<0.05），Bcl-2下调（P<0.01）。

• 耐药基因抑制：P-gp、MRP1表达显著降低（P<0.05）。

3. 药物联用逆转耐药性

• MK2206（Akt抑制剂） ：联合顺铂使耐药细胞内药物浓度提升，MDR1、BCRP、GST-π基因表达下调（P<0.05），IC50降低2.9-9.69倍。

• 柚皮苷（NRG） ：与顺铂协同抑制A549/DDP细胞活力（协同指数<1），下调p-Akt、CXCR4通路（P<0.05）。

三、产品应用

1. 耐药机制研究

• DNA修复通路：通过稳定BRCA1 mRNA增强同源重组修复（HRR），Western blot显示RAD51、γ-H2AX表达差异（P<0.05）。

• 转运蛋白功能：ABCG2（BCRP）过表达导致药物外排增加，流式细胞术验证荧光标记顺铂蓄积减少。

2. 药物筛选与开发

• 纳米载体评估：CuFe2O4/silica/顺铂系统在pH 5.6条件下缓释药物，MTT实验显示联合组细胞存活率降低30%（P<0.01）。

• 天然化合物增效：甘草酸联合顺铂使Bax/caspase-3表达上调2倍，Bcl-2下调50%（P<0.05）。

3. 基因治疗靶点验证

• RNA干扰技术：shRNA沉默XIST lncRNA后，MDR1、MRP1表达降低，细胞凋亡率提升15%（P<0.01）。

四、数据支持

• 耐药性数据：IC50提升2.4倍；耐药倍数（RF）达9.80。

• 基因表达差异：MDR1、BCRP mRNA表达上调15-44倍；BRCA1稳定性增强。

• 凋亡与增殖：沉默PART1后凋亡率提升20%；RSR1敲降抑制增殖50%。

精品啪啪一级免费视频 上海淳麦生物科技有限公司提供高质量MCF7/DDP细胞系，助力肿瘤耐药研究与药物开发！