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凯氏定氮法与分光光度法的优缺点
凯氏定氮法的优点:可用于所有食品的蛋白质分析中;操作相对比较简单;实验费用较低;结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法;用改进方法(微量凯氏定氮法)可测定样品中微量的蛋白质。
缺点:终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮;实验时间太长(至少需要2h才能完成);精度差,精度低于双缩脲法;所用试剂有腐蚀性。
分光光度法的优点:灵敏度高;仪器设备简单,操作简便、快速;应用广泛。
缺点是:准确度相对不高;有的检测不可用,有限制性。
蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,并换算成蛋白质含量。
赛亚斯凯氏定氮仪 概述:
KDN凯氏定氮仪是依据经典(凯氏定氮)方法设计的自动测氮蒸馏系统。仪器主要工作流程有:自动加水(含自动水位检测功能)、自动加碱(按钮控制)、手动加酸(手工配置)、自动蒸馏(按钮控制)等几部分。该仪器操作简单;使用安全、可靠;省时、省力;适用于粮油检测、饲料分析、植物养分测试、土肥检测、医药、化工等行业的分析、教学及研究中,是操作使用人员的理想工具。2.工作原理 (凯氏原理):
蛋白质是含氮的有机化合物。食品和硫酸及催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后在碱化蒸馏作用下使氨游离,释放出来的氨气和水蒸气一起经过冷凝管冷凝后,进入装有硼酸的锥形瓶中。被硼酸吸收后再用硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即得到蛋白质含量。
2.1.(消化炉部分)有机物中的铵根在强热和催化剂及浓H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反应式为: 2NH2-+H2S04+2H+=(NH4)2S04
2.2.(蒸馏器部分)装有消化后样品的消化管在高温蒸汽作用下与碱作用,放出NH3 和水蒸气,收集于H3BO3 溶液中
反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH高温蒸汽=2NH3↑+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
2.3. (滴定部分)用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,得到蛋白质的含量
反应式为: (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
3.操作步骤:
取样→ 消化 → 蒸馏→ 滴定 → 计算
4.整套仪器组成:
含消化炉(本公司供选配KDN-04C、KDN-08C、KDN-20C等消化炉型号)和KDN系列凯氏定氮仪蒸馏器组成。
二.技术参数
1.测定品种:粮食、饲料、食品、乳制品、饮料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等。
2.工作方式:半自动。
3.测定数量:采用单个连续蒸馏测量。
4.测定范围:含氮在0.1~200mgN(毫克氮) (含氮量0.1%~99%)
5.回收率:≥99%(相对误差,包括消化过程)
6.重复率:相对标准偏差<±1%
7.工作时间:蒸馏时间5-15分钟( 根据样品和含氮量的不同而定)
8.额定电压: 220V/50Hz。
9. 额定功率:800W
10.冷却水消耗: 3-4L/min(水温低于25度)