血清中的沉淀是怎么回事？

血清中含有丰富的营养物质，包括各种蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，其中一些物质在特定的条件下容易形成沉淀。无论血清产地、品质如何，血清冻融后产生沉淀是无法避免的，因此各类血清以及含有血清的产品都可能会产生沉淀。

一、血清沉淀是什么？

在血清解冻后发现浑浊及絮状物质时，不必惊慌，这是正常现象。常见血清的沉淀物有以下几种：

纤维蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中，血清采集、过滤(3次0.1μm过滤）和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集形成肉眼可见的沉淀。

磷酸钙（Calcium Phosphate）

常见的一种沉淀物，会造成血清浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，并且由于布朗运动看上去像在活动，因此经常被误认为是微生物污染。

其他成分（Other）

血清中的其他成分也会形成沉淀，例如胆固醇和其他蛋白沉淀等。 

二、血清沉淀是污染吗？

前面提到过磷酸钙在倒置显微镜下像小幅振动的小黑点，容易被误认为是微生物污染，但其实血清沉淀并不是污染。

由于在37℃的温度下培养，会加剧磷酸钙颗粒产生，故空培血清验证污染的方法也不太合理。

我们可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养，观察是否存在细菌增殖，并且进行革兰氏染色，观察判断是否为微生物污染。

三、血清沉淀会影响细胞生长吗？

血清出现沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出现，根据逍鹏多年细胞培养测试经验，血清沉淀的多少与血清的使用效果没有必然关系。
建议更换新批次血清的时候，取少量细胞进行试培养，以确定是否影响后续细胞生长。

四、为了减少血清絮状物沉淀的出现，在使用过程中一定要注意以下细节：

1. 解冻血清时，建议不时将血清摇晃均匀，目的是使温度及成分均一，减少絮状物沉淀的发生；

2. 勿直接将血清由-20℃置37℃解冻，因为这样温度变化太大，很容易造成蛋白析出；建议将血清从冷冻室先移至2-8℃冰箱解冻，再放置于室温进行全部解冻；

3. 严禁将血清在37℃长时间孵育解冻，否则血清可能会产生沉淀，同时，血清中许多较不稳定的成分也会因此受到破坏，从而影响到血清的品质；

4. 血清热灭活容易造成沉淀物增多，若非必要，可以无需进行此步骤；

5. 若必须要做血清的热灭活，也请遵循56℃，30min的原则，并且不时摇晃均匀，因为温度过高，时间过久或者摇晃不均匀都会造成沉淀物的增多。

五、如何去除血清中沉淀

非生物污染因素产生的血清沉淀，不会影响血清本身的功能，但从使用体验角度出发，大量的沉淀很容易遮挡视线，影响对培养基状态的观察；而微量沉淀又容易与细胞污染混淆，影响实验人员的判断。

因此，如果血清中有非生物污染的沉淀，想要去除，该如何操作呢？

我们推荐采用低速离心的方法：1000rpm以内，1-2分钟，或简单让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。

一般不推荐过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。

六、总结

血清产品中出现沉淀属于常见现象，无需过多担心，并且不会影响血清的品质，对细胞培养而言，也是没有任何问题的，您可以放心使用。