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精品啪啪一级免费视频 植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚微板法)

时间:2022/11/21阅读:603
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植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚微板法)

产品货号:BA1774

 

产品规格:100T

 

产品简介:

过氧化物酶(peroxisomePOD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶,主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢,氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用,该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚微板)检测原理是以愈创木酚(又称2-甲氧基酚)作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于分光光度计470nm处测定吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算,该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的过氧化物酶活性,尤其适用于测定水果中过氧化物酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

试剂名称

100T

保存条件

试剂(A): POD Lysis buffer

2×250ml

2-8

试剂(B): POD Assay buffer

10ml

2-8℃,避光

试剂(C): POD 氧化剂

1ml

2-8

 

自备材料:

1. 蒸馏水

2. 研钵或匀浆器

3. 离心管

4. 低温离心机

5. 水浴锅或恒温箱

6. 96孔板、酶标仪

 

操作步骤:

1. 准备样品:

植物样品:取2g植物组织或水果中层果肉加入4ml冷的POD Lysis buffer研磨或匀浆,4℃ 10000g离心15~20min,留取上清液,即为POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。

血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。

细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用POD Lysis buffer进行适当匀浆,4℃ 10000g离心 15~20min,留取上清液,即为POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。

高活性样品:如果样品中含有较高活性的过氧化物酶,可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。

2. 配制POD Assay buffer工作液:取适量的POD氧化剂和POD Assay buffer,按POD氧化剂:POD Assay buffer=114混合,即为POD Assay buffer工作液,即配即用,不宜久置。

3. POD加样:按照下表设置对照管、测定管,注意:对照管、测定管中为同一待测样品,但对照管中为提前加热煮沸5min的样品。溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,如果样品中的POD活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。

加入物(μl

对照孔

测定孔

待测样品

5(提前煮沸5min)

5

POD Lysis buffer

145

145

POD Assay buffer工作液

100

100

4. POD测定:立即以酶标仪,以对照孔为对照,测定470nm处测定孔的吸光度(A测定0 )

 

计算:

POD活性单位的定义:在该实验条件下,每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。

组织样本 POD(U)={(A测定1 -A测定0 )×V T }/(W×V S ×0.01×t)

式中:A测定1 =孵育3min后测定的吸光度

A测定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即测定的吸光度

W=组织样本的重量(g)

V T =提取酶液的总体积(ml)

V S =测定时所用酶液体积(ml)

t=反应时间

 

液体样本 POD(U)=(A测定1 -A测定0 )/(0.01×t)

式中:A测定1 =孵育3min后测定孔的吸光度值

A测定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值

t=反应时间

 

注意事项:

1. 待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。

2. POD酶液提取时,注意低温操作,防止酶活性。

3. 以煮沸的酶液为对照时,酶要充分失活。

4. POD氧化剂具有一定腐蚀性,请小心操作。

5. POD氧化剂易挥发,请密闭保存,否则检测效率下降。

6. 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。

7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 6个月有效。常温运输,4℃保存。

 

 


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