植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚微板法)
产品货号:BA1774
产品规格:100T
产品简介:
过氧化物酶(peroxisome,POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶,主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢,氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用,该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚微板法)检测原理是以愈创木酚(又称2-甲氧基酚)作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,于分光光度计470nm处测定吸光度,以吸光度变化所需酶量进行计算,该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的过氧化物酶活性,尤其适用于测定水果中过氧化物酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
试剂名称 | 100T | 保存条件 |
试剂(A): POD Lysis buffer | 2×250ml | 2-8℃ |
试剂(B): POD Assay buffer | 10ml | 2-8℃,避光 |
试剂(C): POD 氧化剂 | 1ml | 2-8℃ |
自备材料:
1. 蒸馏水
2. 研钵或匀浆器
3. 离心管
4. 低温离心机
5. 水浴锅或恒温箱
6. 96孔板、酶标仪
操作步骤:
1. 准备样品:
①植物样品:取2g植物组织或水果中层果肉加入4ml预冷的POD Lysis buffer研磨或匀浆,4℃ 10000g离心15~20min,留取上清液,即为POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用POD Lysis buffer进行适当匀浆,4℃ 10000g离心 15~20min,留取上清液,即为POD粗提液,-20℃冻存,用于过氧化物酶的测定。
④高活性样品:如果样品中含有较高活性的过氧化物酶,可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。
2. 配制POD Assay buffer工作液:取适量的POD氧化剂和POD Assay buffer,按POD氧化剂:POD Assay buffer=1:14混合,即为POD Assay buffer工作液,即配即用,不宜久置。
3. POD加样:按照下表设置对照管、测定管,注意:对照管、测定管中为同一待测样品,但对照管中为提前加热煮沸5min的样品。溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,如果样品中的POD活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。
加入物(μl) | 对照孔 | 测定孔 |
待测样品 | 5(提前煮沸5min) | 5 |
POD Lysis buffer | 145 | 145 |
POD Assay buffer工作液 | 100 | 100 |
4. POD测定:立即以酶标仪,以对照孔为对照,测定470nm处测定孔的吸光度(A测定0 )。
计算:
POD活性单位的定义:在该实验条件下,每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样本 POD(U)={(A测定1 -A测定0 )×V T }/(W×V S ×0.01×t)
式中:A测定1 =孵育3min后测定孔的吸光度
A测定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即测定孔的吸光度
W=组织样本的重量(g)
V T =提取酶液的总体积(ml)
V S =测定时所用酶液体积(ml)
t=反应时间
液体样本 POD(U)=(A测定1 -A测定0 )/(0.01×t)
式中:A测定1 =孵育3min后测定孔的吸光度值
A测定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值
t=反应时间
注意事项:
1. 待测样品中不能含有酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2. POD酶液提取时,注意低温操作,防止酶活性。
3. 以煮沸的酶液为对照时,酶要充分失活。
4. POD氧化剂具有一定腐蚀性,请小心操作。
5. POD氧化剂易挥发,请密闭保存,否则检测效率下降。
6. 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,每次检测指标不宜过多,否则操作时间不一,有可能导致样本间的差异。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。常温运输,4℃保存。
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