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精品啪啪一级免费视频 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂微板法)

时间:2022/12/1阅读:354
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总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂微板法)

产品货号:BA1762

 

产品规格:100T

 

产品简介:

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织多,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。用酶学方法测定总胆固醇(Total CholesterolTC)是生化检测中的常用方法,其特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂微板法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等,血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇,2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯,后者被胆固醇酯酶(CEH)水解为游离胆固醇,游离胆固醇被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮,并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化,使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应,生成红色醌亚胺色素(Trinder反应),分光光度计在500~520nm处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

试剂名称

100T

保存条件

试剂(A)COD-PAP

工作液

Good's buffer

30ml

-20℃,避光

胆固醇氧化酶

胆固醇激酶

过氧化物酶

4-氨基安替比林

稳定剂

试剂(B)TC标准(5mmol/L

1ml

-20℃,避光

试剂(C): ddH2O 

1ml

室温

 

自备材料:

1. 生理盐水或PBS

2. 离心管、小试管或96孔板

3. 水浴锅或恒温箱

4. 分光光度计或酶标仪

5. 全自动或半自动生化分析仪

 

操作步骤:

1. 样本处理:

血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。

细胞样本:

a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。

b、用PBS或生理盐水清洗1~2次,1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。

c、加入200~300μlPBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复 3~5次。亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min,制备好的裂解液不可离心。

组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水或PBS(ml)=19的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆。2500~3000g离心10min,取上清。

2. TC测定

酶标仪、全自动生化分析仪TC测定

加入物(μl)

空白孔

标准孔

待测孔

ddH2O

3

-

-

TC标准(5mmol/L)

-

3

-

待测样本

-

-

3

COD-PAP工作液

300

300

300

 

分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪TC测定

加入物(ml)

空白管

标准管

待测管

ddH2O

0.01

-

-

TC标准(5mmol/L)

-

0.01

-

待测样本

-

-

0.01

COD-PAP工作液

1

1

1

 

普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定

加入物(ml)

空白管

标准管

待测管

ddH2O

0.02

-

-

TC标准(5mmol/L)

-

0.02

-

待测样本

-

-

0.02

COD-PAP工作液

2

2

2

各种仪器按上表依次加入试剂。充分混匀, 37℃水浴中孵育5min

立即用相应仪器测定500~520nm吸光度,以空白孔()调零,读取标准孔()、测定孔()的吸光度,分别记为A标准A测定。

 

机器参数:

主波长/次波长

500/600nm

反应类型

终点法

反应反向

升反应(+)

 

计算公式:

血清、血浆等液体样本(空白调零)

FC(mmol/L)= A测定/ A标准×5

血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5

 

组织样本(空白调零)

FC(mmol/g)= A测定/ A标准×5×V2 /( m ×1000)

组织样本(全自动生化分析仪)

FC(mmol/g)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5×V/( m ×1000)

细胞样本(空白调零)

FC(mmol/L)= A测定/ A标准×5×V2 / V1

细胞样本(全自动生化分析仪)

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准 - A空白)×5×V2 / V1

中:m=组织样本取样量(g

V1 =细胞样本取样量(ml

V2 =样本匀浆液总体积(ml

 

参考区间:

健康成年人理想范围:<5.2mmol/L(<200mg/dl)

边缘升高:<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)

升高:≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)

备注:TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl

 

性能指标:

外观

无色至淡黄色澄清液体

线性范围

0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)R2 >0.95

灵敏度

检测下限0.1mmol/L(3.6mg/dl)

变异系数

批内<3%,批间<5%

空白吸光值

<0.1(1cm光径)

干扰因素

胆红素<410μmol/L;血红蛋白<7g/L;甘油三脂<28.5mmol/L 时,对结果无明细影响。

 

注意事项:

1. 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

2. COD-PAP工作液如不经常使用,应充分溶解后分装-20℃保存,可4℃短期保存。

3. 本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量,但不能直接检测尿液中的TC含量,因为未经处理的尿液中含有还原性物质,影响过氧化物酶反应。

4. 检测TC的血清或血浆宜用EDTA或肝素抗凝,如不能及时测定,密闭保存,4℃可稳定一周,-20℃可以稳定半年以上。

5. 本法线性范围可达13mmol/L,如果样本TC浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

6. 本试剂盒既可作终点法检测,又可作速率法检测。

7. 本法不适于检测游离胆固醇的浓度。

 

保存条件6个月有效。4℃运输,-20℃保存。


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