胰蛋白酶溶液(0.1%)
产品货号:T10398
产品规格:100ml
产品简介:
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其最适温度约为37℃。
尚宝生物 Trypsin solution(0.1%)含0.1%胰酶、无EDTA、无酚红,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化或者一些组织的消化。通常室温下1min左右就可以消化下大多数贴壁细胞。抗原修复有多种方法,主要方法可简要归纳为加热修复和非加热抗原修复两大类。非加热抗原修复方法包括酶消化、真空负压、酸水解等方法。目前主要是酶消化法,酶消化是以化学的方法来打断醛键进行修复抗原。
产品组成:
名称 | 规格 | 保存条件 |
胰蛋白酶溶液(0.1%) | 100ml | -20℃ |
自备材料:
1. PBS、Hanks液或无血清培养液
2. 显微镜
3. 离心机
操作步骤(仅供参考):
1. 抗原修复
①切片脱蜡至水。
②切片入H2O2甲醇溶液处理切片10min。
③自来水洗,蒸馏水洗。
④PBS洗3次,每次1min。
⑤将玻片浸入Trypsin solution(0.1%),37℃孵育10~30min。
⑥PBS洗3次,每次3min。
⑦按选好的免疫组化染色方法进行染色。
2. 贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量Trypsin solution,略盖过细胞即可,室温放置1~2min,不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入Trypsin solution重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g离心1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
3. 组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项:
1. 尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
2. 在Trypsin solution过程中,要特别注意避免消化液被细菌污染。
3. Trypsin solution消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。
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