植物核DNA大量提取试剂盒
产品货号:BA1848
产品规格:20T
产品简介:
从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典且迅速的植物DNA提取法,可以用于多种不同类型植物样品中DNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。
植物核DNA大量提取试剂盒是简单快速简便的提取植物核中DNA的试剂盒,先将新鲜植物样本研磨破碎细胞壁,采用差速离心法分离出细胞核并将其破碎,再用CTAB抽提液提取出核DNA。本法制备量大,所提DNA可供进一步纯化及基因转化使用。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品名称 | 20T | 保存条件 |
试剂(A): 核分离缓冲液 | 500ml | 2-8℃ |
试剂(B): 核冲洗缓冲液 | 100ml | 2-8℃ |
试剂(C): 核储存缓冲液 | 20ml | 2-8℃ |
试剂(D1): 核裂解缓冲液 | 10ml | 2-8℃ |
试剂(D2): 蛋白酶K溶液(20mg/ml) | 0.5ml | -20℃,避光 |
试剂(E1): CTAB抽提液 | 10ml | 室温 |
试剂(E2): 2-ME | 0.5ml | 室温,避光 |
试剂(F): 蛋白沉淀剂 | 30ml | 2-8℃,避光 |
试剂(G): CTAB溶液(10%) | 2ml | 室温 |
试剂(H): DNA沉淀液 | 50ml | 室温,避光 |
试剂(I): DNA洗涤液 | 50ml | 室温 |
试剂(J1): TE buffer | 10ml | 室温 |
试剂(J2): RNase A(10mg/ml) | 0.1ml | -20℃ |
试剂(K): 乙酸铵溶液(7.5M) | 5ml | 2-8℃ |
自备材料:
1. 液氮、研钵或匀浆器
2. 离心机、离心管
3. 冰箱、恒温箱或水浴锅
4. 二*醚、异丙醇
操作步骤(仅供参考):
(一)样品处理及分离细胞核:
1. 称取10g幼叶样本或8g愈伤组织等,置烧杯中,于通风橱中加入预冷的二*醚,浸没材料,摇晃1~2min,倾出二*醚,预冷的水冲洗样本。
2. 用刀片去除叶脉,并分割成小块,转入匀浆器或研钵中,加入预冷的20ml的核分离缓冲液,中速匀浆1~3min。用4层无菌平纹细布和1层Miracloth过滤匀浆至离心管中。
3. 500r/min 4℃离心10min,去上清。沉淀用1~1.3ml核冲洗缓冲液悬浮,再用500r/min 4℃离心10min(重复2~3次),使细胞核与细胞碎片分离,收集细胞核样品。细胞核可悬浮于核储存缓冲液中,-70℃保存。
(二)细胞核破碎及DNA提取:
1. 配制核裂解液:按核裂解缓冲液:蛋白酶K溶液=1ml:0.025ml的比例混合即成。
2. 将上一步分离的核样品悬浮于0.25ml核裂解液中,37℃保温30min。再向其中加入5ul 2-ME 和90℃预热的0.25ml CTAB抽提液,立即混匀。再加入0.5ml的蛋白沉淀剂,温和地反复颠倒离心管。室温下10000 r/min离心10min,上清转入新的离心管。
3. 加入1/10体积的CTAB溶液(10%)[约0.05ml]。再次加入等体积[约0.5ml]的蛋白沉淀剂,温和地颠倒混匀离心管,室温下3500 r/min离心10min,上清转入新的离心管。
4. 加入1/2~2/3体积预冷的DNA沉淀液,轻轻混匀,室温静置使核酸沉至管底。如果观察不到沉淀,可在室温下静置数小时至过夜。
5. 2000g离心2min,轻轻弃上清液。松散的DNA沉淀物置于小离心管中加入0.5~1ml DNA洗涤液,室温静置10min,4000r/min离心10min,收集沉淀,重复操作两次,清除CTAB。
6. 自然干燥DNA,加入20~50μl TE buffer- RNase A混合液(1ml+1ul),37℃保温1h。加入乙酸铵溶液(7.5M)使终浓度为2.5M,并加入2倍体积的预冷无水乙醇,温和混匀,室温放置10min。
7. 室温15000r/min离心10min,收集沉淀,吹干保存,使用时溶于适量TE buffer,-20℃保存。注意:TE buffer体积越大,DNA浓度越低。
注意事项:
1. 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
2. 用于裂解植物组织或叶片越新鲜,裂解越好、收获量越大。
3. 二*醚处理材料可促进角质层溶解及细胞破裂。
4. 提取过程中的机械力可使大分子DNA断裂,因此各步操作均应温和,避免剧烈震荡。
5. 使用到的器皿、离心管最好经过硅化处理。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。
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