精品啪啪一级免费视频 植物核DNA大量提取试剂盒使用说明书

植物核DNA大量提取试剂盒

产品货号：BA1848

产品规格：20T

产品简介：

从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典且迅速的植物DNA提取法，可以用于多种不同类型植物样品中DNA的提取，获得的量很高，但是纯度一般，但是足够用于大多数分子生物学实验。

植物核DNA大量提取试剂盒是简单快速简便的提取植物核中DNA的试剂盒，先将新鲜植物样本研磨破碎细胞壁，采用差速离心法分离出细胞核并将其破碎，再用CTAB抽提液提取出核DNA。本法制备量大，所提DNA可供进一步纯化及基因转化使用。该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 液氮、研钵或匀浆器

2. 离心机、离心管

3. 冰箱、恒温箱或水浴锅

4. 二*醚、异丙醇

操作步骤(仅供参考):

(一)样品处理及分离细胞核：

1. 称取10g幼叶样本或8g愈伤组织等，置烧杯中，于通风橱中加入预冷的二*醚，浸没材料，摇晃1~2min，倾出二*醚，预冷的水冲洗样本。

2. 用刀片去除叶脉，并分割成小块，转入匀浆器或研钵中，加入预冷的20ml的核分离缓冲液，中速匀浆1~3min。用4层无菌平纹细布和1层Miracloth过滤匀浆至离心管中。

3. 500r/min 4℃离心10min，去上清。沉淀用1~1.3ml核冲洗缓冲液悬浮，再用500r/min 4℃离心10min（重复2~3次），使细胞核与细胞碎片分离，收集细胞核样品。细胞核可悬浮于核储存缓冲液中，-70℃保存。

(二)细胞核破碎及DNA提取：

1. 配制核裂解液：按核裂解缓冲液：蛋白酶K溶液=1ml：0.025ml的比例混合即成。

2. 将上一步分离的核样品悬浮于0.25ml核裂解液中，37℃保温30min。再向其中加入5ul 2-ME 和90℃预热的0.25ml CTAB抽提液，立即混匀。再加入0.5ml的蛋白沉淀剂，温和地反复颠倒离心管。室温下10000 r/min离心10min，上清转入新的离心管。

3. 加入1/10体积的CTAB溶液(10%)[约0.05ml]。再次加入等体积[约0.5ml]的蛋白沉淀剂，温和地颠倒混匀离心管，室温下3500 r/min离心10min，上清转入新的离心管。

4. 加入1/2～2/3体积预冷的DNA沉淀液，轻轻混匀，室温静置使核酸沉至管底。如果观察不到沉淀，可在室温下静置数小时至过夜。

5. 2000g离心2min，轻轻弃上清液。松散的DNA沉淀物置于小离心管中加入0.5~1ml DNA洗涤液，室温静置10min，4000r/min离心10min，收集沉淀，重复操作两次，清除CTAB。

6. 自然干燥DNA，加入20～50μl TE buffer- RNase A混合液（1ml+1ul），37℃保温1h。加入乙酸铵溶液(7.5M)使终浓度为2.5M，并加入2倍体积的预冷无水乙醇，温和混匀，室温放置10min。

7. 室温15000r/min离心10min，收集沉淀，吹干保存，使用时溶于适量TE buffer，-20℃保存。注意：TE buffer体积越大，DNA浓度越低。

注意事项:

1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。

2. 用于裂解植物组织或叶片越新鲜，裂解越好、收获量越大。

3. 二*醚处理材料可促进角质层溶解及细胞破裂。

4. 提取过程中的机械力可使大分子DNA断裂，因此各步操作均应温和，避免剧烈震荡。

5. 使用到的器皿、离心管最好经过硅化处理。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。