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精品啪啪一级免费视频 植物核DNA大量提取试剂盒使用说明书

时间:2023/2/6阅读:350
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植物核DNA大量提取试剂盒

产品货号:BA1848

产品规格:20T

产品简介:

从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典且迅速的植物DNA提取法,可以用于多种不同类型植物样品中DNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。

植物核DNA大量提取试剂盒是简单快速简便的提取植物核中DNA的试剂盒,先将新鲜植物样本研磨破碎细胞壁,采用差速离心法分离出细胞核并将其破碎,再用CTAB抽提液提取出核DNA。本法制备量大,所提DNA可供进一步纯化及基因转化使用。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

产品名称

20T

保存条件

试剂(A): 核分离缓冲液

500ml

2-8

试剂(B): 核冲洗缓冲液

100ml

2-8

试剂(C): 核储存缓冲液

20ml

2-8

试剂(D1): 核裂解缓冲液

10ml

2-8

试剂(D2): 蛋白酶K溶液(20mg/ml)

0.5ml

-20℃,避光

试剂(E1): CTAB抽提液

10ml

室温

试剂(E2): 2-ME

0.5ml

室温,避光

试剂(F): 蛋白沉淀剂

30ml

2-8℃,避光

试剂(G): CTAB溶液(10%)

2ml

室温

试剂(H): DNA沉淀液

50ml

室温,避光

试剂(I): DNA洗涤液

50ml

室温

试剂(J1): TE buffer

10ml

室温

试剂(J2): RNase A(10mg/ml)

0.1ml

-20

试剂(K): 乙酸铵溶液(7.5M)

5ml

2-8

自备材料:

1. 液氮、研钵或匀浆器

2. 离心机、离心管

3. 冰箱、恒温箱或水浴锅

4. 二*醚、异丙醇

操作步骤(仅供参考):

()样品处理及分离细胞核:

1. 称取10g幼叶样本或8g愈伤组织等,置烧杯中,于通风橱中加入预冷的二*醚,浸没材料,摇晃1~2min,倾出二*醚,预冷的水冲洗样本。

2. 用刀片去除叶脉,并分割成小块,转入匀浆器或研钵中,加入预冷的20ml的核分离缓冲液,中速匀浆1~3min。用4层无菌平纹细布和1Miracloth过滤匀浆至离心管中。

3. 500r/min 4℃离心10min,去上清。沉淀用1~1.3ml核冲洗缓冲液悬浮,再用500r/min 4℃离心10min(重复2~3次),使细胞核与细胞碎片分离,收集细胞核样品。细胞核可悬浮于核储存缓冲液中,-70℃保存。

()细胞核破碎及DNA提取:

1. 配制核裂解液:按核裂解缓冲液:蛋白酶K溶液=1ml0.025ml的比例混合即成。

2. 将上一步分离的核样品悬浮于0.25ml核裂解液中,37℃保温30min。再向其中加入5ul 2-ME 90℃预热的0.25ml CTAB抽提液,立即混匀。再加入0.5ml的蛋白沉淀剂,温和地反复颠倒离心管。室温下10000 r/min离心10min,上清转入新的离心管。

3. 加入1/10体积的CTAB溶液(10%)[0.05ml]。再次加入等体积[0.5ml]的蛋白沉淀剂,温和地颠倒混匀离心管,室温下3500 r/min离心10min,上清转入新的离心管。

4. 加入1/22/3体积预冷的DNA沉淀液,轻轻混匀,室温静置使核酸沉至管底。如果观察不到沉淀,可在室温下静置数小时至过夜。

5. 2000g离心2min,轻轻弃上清液。松散的DNA沉淀物置于小离心管中加入0.5~1ml DNA洗涤液,室温静置10min4000r/min离心10min,收集沉淀,重复操作两次,清除CTAB

6. 自然干燥DNA,加入2050μl TE buffer- RNase A混合液(1ml+1ul),37℃保温1h。加入乙酸铵溶液(7.5M)使终浓度为2.5M,并加入2倍体积的预冷无水乙醇,温和混匀,室温放置10min

7. 室温15000r/min离心10min,收集沉淀,吹干保存,使用时溶于适量TE buffer-20℃保存。注意:TE buffer体积越大,DNA浓度越低。

注意事项:

1. 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。

2. 用于裂解植物组织或叶片越新鲜,裂解越好、收获量越大。

3. 二*醚处理材料可促进角质层溶解及细胞破裂。

4. 提取过程中的机械力可使大分子DNA断裂,因此各步操作均应温和,避免剧烈震荡。

5. 使用到的器皿、离心管最好经过硅化处理。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期6个月有效。



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