143B人骨肉瘤细胞培养条件与操作规范：
1. 培养基与环境
基础培养基：DMEM或MEM，补充10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素/链霉素)。
培养条件：37℃、5% CO₂、饱和湿度，培养箱湿度建议70%-80%。
容器适配：T25瓶(8-10mL培养基)、10cm皿(12-15mL)，根据细胞密度调整换液频率(每2-3天一次)。
2. 关键操作步骤
复苏：
37℃水浴快速解冻，离心(1000rpm，3-5min)去除冻存液。
新鲜培养基重悬后接种，次日观察细胞贴壁情况。
传代：
密度达80%-90%时，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟，显微镜下观察细胞间隙变大即终止消化。
传代比例1:2至1:4，轻柔吹打避免气泡，维持细胞活性。
冻存：
冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO，密度0.5-1×10⁶细胞/mL。
程序降温盒-80℃过夜后转液氮，需复苏验证活性。
3. 质量控制
鉴定与检测：定期进行STR鉴定和支原体检测，确保遗传背景稳定且无污染。
状态监测：传代后镜检并拍照记录，观察细胞形态及碎片情况，及时清理死细胞。
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