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143B人骨肉瘤细胞综合解析

阅读:153      发布时间:2025-5-8
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  143B人骨肉瘤细胞培养条件与操作规范:
 
  1. 培养基与环境
 
  基础培养基:DMEM或MEM,补充10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素/链霉素)。
 
  培养条件:37℃、5% CO₂、饱和湿度,培养箱湿度建议70%-80%。
 
  容器适配:T25瓶(8-10mL培养基)、10cm皿(12-15mL),根据细胞密度调整换液频率(每2-3天一次)。
 
  2. 关键操作步骤
 
  复苏:
 
  37℃水浴快速解冻,离心(1000rpm,3-5min)去除冻存液。
 
  新鲜培养基重悬后接种,次日观察细胞贴壁情况。
 
  传代:
 
  密度达80%-90%时,用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟,显微镜下观察细胞间隙变大即终止消化。
 
  传代比例1:2至1:4,轻柔吹打避免气泡,维持细胞活性。
 
  冻存:
 
  冻存液配方:90% FBS + 10% DMSO,密度0.5-1×10⁶细胞/mL。
 
  程序降温盒-80℃过夜后转液氮,需复苏验证活性。
 
  3. 质量控制
 
  鉴定与检测:定期进行STR鉴定和支原体检测,确保遗传背景稳定且无污染。
 
  状态监测:传代后镜检并拍照记录,观察细胞形态及碎片情况,及时清理死细胞。

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