收到细胞后请先置于培养箱中稳定2 ~ 4h后再进行下一步处理，不建议放置培养箱过夜后处理；

将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，1200rpm离心3min收集细胞；

去掉上清，用PBS重悬细胞（以手摇离心管的方式重悬，不要用移液枪吹），将细胞收集到一个离心管中，再次1200rpm离心3min；

去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重悬细胞（还是以手摇离心管的方式混匀，不要吹细胞）, 放入培养箱消化2min；

消化2min后，加入5mL完-全培养基混匀终止消化，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，1200rpm离心3min；

去掉上清，加入6mL左右细胞相应的完-全培养基混匀，视细胞量决定是1:2传代-还是1:3传代（由于细胞运输有损伤，首-次传代建议比平时养密度稍高）；

显微镜下观察细胞是否有分散成单颗现象，若有明显很大的细胞团需要重复上述步骤二次消化；

第二天及时观察细胞贴壁情况，若贴壁细胞量过多，造成细胞堆积，贴壁24h后再次传代分瓶，若密度正常则继续生长，不建议换液，贴壁48h后换液去掉不能贴壁的细胞。

细胞贴壁松散，操作时应轻拿轻放；

培养时可将培养瓶/皿进行包被；

PBS润洗时动作应缓慢，避免冲走细胞；

细胞传代第二天可能有轻微聚团现象，再长一天能长开，不建议传代第二天换液，以免损失细胞。